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抑制Ppif基因的表达减轻大鼠肾缺血再灌注损伤

作　者: 马杰锋
导　师: 陈志强
学　校: 华中科技大学
专　业: 外科学
关键词: Ppif基因慢病毒载体肾缺血再灌注损伤凋亡
分类号: R363
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

目的通过抑制Ppif基因的表达,观察其对实验大鼠缺血再灌注损伤肾脏所起的保护效果,并分析、讨论其作用原理。方法首先用大鼠建立肾缺血再灌注模型,并随机将实验大鼠分组(共3组):空白对照组(NC Group)、阴性对照组(CON Group)、治疗组(Treated Group)(每组各20只大鼠)。治疗组大鼠再灌注时注射Ppif基因靶向RNAi慢病毒载体,剂量0.3 mL(4μg/ g),阴性对照组再灌注时注射0.3 mL生理盐水(含体积分数0.01 DMSO,即二甲基亚砜),空白对照组不处理肾蒂,即肾脏未经历缺血再灌注,其余处理措施按阴性对照组方法进行。达预定时间后,分别用相应方法检测各实验组大鼠细胞凋亡指数(AI)、血肌酐(Cr)水平、血尿素氮(BUN)水平、HE染色细胞病理切片检查。结果治疗组大鼠相对于阴性对照组大鼠,血液中Cr和BUN测定数值均明显下降,AI明显减低,二者的差异均有统计学意义(P <0.05)。病理学检查结果(HE组织染色方法)显示:3组大鼠对比,治疗组大鼠缺血明显减轻。结论大鼠Ppif基因的表达能够被Ppif基因靶向RNAi慢病毒载体有效抑制,从而达到抑制线粒体途径凋亡的目的,最终当大鼠肾脏缺血再灌注出现时,起到对缺血肾脏有效的保护作用。

全文目录

中文摘要  5-6
ABSTRACT  6-7
引言  7-10
实验过程简介  10-11
1 材料与方法  11-15
  1.1 试剂  11
  1.2 动物及分组  11
  1.3 试验方法  11-13
    1.3.1 携带有效SIRNA 片段的RNAI 慢病毒载体的构建  11-12
    1.3.2 动物模型制备  12
    1.3.3 给药治疗方法  12-13
  1.4 评价肾脏损害相关检测指标及方法  13-15
  1.5 实验数据统计处理  15
2 结果  15-18
  2.1 观察感染效率（NRK 细胞）  15-16
  2.2 应用携带有效SIRNA 片段的RNAI 慢病毒载体抑制PPIF 基因的表达，通过观察各项指标变化，判断其对I/ R 损伤肾脏功能变化的作用效果  16-17
  2.3 通过观察细胞凋亡率（AI），判断本实验相关因子对肾脏细胞凋亡的影响  17
  2.4 对比观察各组病理切片  17-18
3 讨论  18-21
参考文献  21-23
综述  23-40
  参考文献  34-40
附录一本人参与本课题发表的文献  40-41
附录二本实验所应用主要相关仪器设备  41-42
附录三本实验所用主要试剂配方  42-43
致谢  43

抑制Ppif基因的表达减轻大鼠肾缺血再灌注损伤

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