学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

葡萄PR基因启动子活性分析及ERF对PR基因表达的调控

作　者: 刘纪元
导　师: 侯和胜
学　校: 辽宁师范大学
专　业: 遗传学
关键词: 葡萄 启动子 顺式作用元件 转录因子 瞬时表达
分类号: Q943.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
下　载: 4次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载
 

内容摘要


植物在生长发育过程中会受到包括生物胁迫和非生物胁迫在内的各种逆境胁迫,它们严重影响了植物的生长发育及产量。研究表明：当植物受到胁迫后,体内的许多抗逆相关基因会受到上游转录因子的调控,抵抗外界的胁迫,起到自我防御的作用,可见,抗逆相关基因在植物胁迫反应中发挥着重要的作用,因此研究抗逆相关基因调控的分子机制十分必要。病程相关蛋白(PRs)基因是植物抗逆相关基因的一种,本研究以葡萄为对象,克隆得到PR3基因启动子,对其顺式作用元件进行了分析,并研究了顺式作用元件与乙烯响应因子(ERF)之间的相互作用关系,取得如下结果：1.利用PCR扩增技术获得长度为1775bp的欧洲葡萄(Vitis vinifera)病程相关蛋白基因VvPR3的启动子序列,分析发现此序列中含有多种与各类植物激素响应相关的顺式作用元件,如ERE.CGTCA-motif、W-box、TCA-element.MYBGAHV和P-box等,以及与生物胁迫或者非生物胁迫响应相关的顺式作用元件,如MBS.CCAAT-box和ARE等。2.将VvPR3基因启动子进行5’缺失克隆,构建4段长度不等的缺失片段的表达载体。PEG-Ca2+介导法将4个重组表达载体转染拟南芥原生质体细胞并检测报告基因LUC表达量。结果显示随着5’缺失片段长度的增加,报告基因的表达量呈下降趋势,说明在每段5’缺失片段中都含有对下游基因表达起到抑制作用的顺式作用元件。3.将实验室已经构建好的VvERF2和VvERF3b转录因子表达载体分别与4个重组的缺失片段表达载体进行双质粒转染拟南芥原生质体细胞,并检测报告基因LUC的表达量。结果发现：VvERF2转录因子增强了VvPR3基因启动子5’缺失片段的转录活性,对VvPR3基因启动子具有转录激活作用；VvERF3b转录因子减弱了VvPR3基因启动子5’缺失片段的转录活性,对VvPR3基因启动子具有转录抑制作用。综上,本研究初步明确了VvPR3基因启动子中顺式作用元件的种类、特性,及其与乙烯响应因子(ERF)之间的相互作用关系,为进一步研究病程相关蛋白调控的分子机制提供了理论基础,为高抗性植株的培育提供理论参考。

全文目录


摘要  4-5
Abstract  5-9
1 引言  9-19
  1.1 植物病程相关蛋白研究进展  9-11
    1.1.1 植物病程相关蛋白的生物特性和分类  10
    1.1.2 植物病程相关蛋白的诱导因子  10-11
    1.1.3 植物病程相关蛋白的生物学功能  11
  1.2 植物基因启动子的研究进展  11-13
    1.2.1 植物基因启动子的类型  12-13
    1.2.2 启动子功能分析方法  13
  1.3 ERF转录因子的研究进展  13-16
    1.3.1 ERF转录因子的特点  14
    1.3.2 ERF转录因子的功能  14-16
  1.4 转录因子与启动子顺式作用元件的相互作用  16-17
    1.4.1 转录因子与顺式作用元件相互作用的研究进展  16
    1.4.2 转录因子与顺式作用元件相互作用的研究方法  16-17
  1.5 研究目的及意义  17-18
  1.6 实验的技术路线  18-19
2 实验材料和方法  19-34
  2.1 实验材料  19-22
    2.1.1 生物材料  19
    2.1.2 数据库及软件  19
    2.1.3 主要仪器设备  19
    2.1.4 主要试剂  19-20
    2.1.5 主要药品及培养基的配制  20-22
  2.2 实验方法  22-34
    2.2.1 基因启动子的克隆  22-26
    2.2.2 5’缺失片段表达载体的构建  26-30
    2.2.3 5’缺失片段表达载体活性检测  30-33
    2.2.4 检测VvERF表达载体和VvPR3 5’缺失片段表达载体共转染活性  33-34
3 结果与分析  34-43
  3.1 启动子的克隆与分析  34-37
    3.1.1 VvPR3基因启动子的克隆  34
    3.1.2 VvPR3基因启动子中顺式作用元件的分析  34-37
  3.2 启动子5’缺失片段表达载体的构建  37-39
    3.2.1 VvPR3基因启动子5’缺失片段的克隆  37
    3.2.2 VvPR3基因启动子5’缺失片段与pBI221-LUC表达载体的双酶切  37-38
    3.2.3 VvPR3基因启动子5’缺失片段表达载体的构建  38-39
  3.3 5’缺失片段表达载体活性检测  39-41
    3.3.1 Columbia野生型拟南芥植株的培养  39-40
    3.3.2 拟南芥原生质体的制备  40-41
    3.3.3 LUC报告基因活性检测  41
  3.4 VvERF2、VvERF3b转录因子对VvPR3基因转录的影响  41-43
4 讨论  43-45
5 结论  45-46
参考文献  46-52
附录A 论文中所用DNA marker  52-53
攻读硕士学位期间发表学术论文情况  53-54
致谢  54

相似论文

  1. 多转录因子组合调控研究,Q78
  2. 经典Wnt信号关键基因在人早期牙齿发育中的表达检测,R78
  3. 水稻茎叶特异表达基因启动子的筛选及分析,S511
  4. 磷酸化介导的UGT1A3代谢活性差异的初步研究,R346
  5. 葡萄籽原花青素制备工艺及真菌毒素检测,TQ461
  6. 益肾活血法防治肾结石体外冲击波碎石术后肾损伤的临床研究,R277.5
  7. 猪BMP7基因启动子多态性及其与繁殖性状关联性分析,S828
  8. 烟草中NAC类转录因子基因的克隆与分析,Q943.2
  9. 嗜热菌几丁质结合域及其在酶固定化中应用的研究,Q814
  10. 鹰嘴豆热激转录因子CarHSFB2的克隆与功能验证,Q943.2
  11. 转录因子在棉纤维起始期的表达特征及三个转录因子基因的克隆与功能初步分析,Q943
  12. 水稻纹枯病菌三磷酸甘油醛脱氢酶基因的克隆及其遗传转化体系的构建,S435.111.42
  13. Pib结构基因在不同启动子驱动下的稻瘟病抗性,S435.111.41
  14. 大豆细菌性斑点病原物的分离鉴定及其两个Ⅲ型效应因子的克隆与功能研究,S435.651
  15. 小麦苗期磷胁迫诱导紫色酸性磷酸酶基因和转录因子基因cDNA片段的克隆与分析,S512.1
  16. 小麦UDP-葡萄糖基转移酶基因Ta-UGT3的表达载体构建和转化小麦研究,S512.1
  17. 人下肢动脉硬化狭窄时血管内膜巨噬细胞、平滑肌细胞、胶原及中膜CPT-Ⅰ、GLUT-4的变化,R543.5
  18. 棉铃虫细胞色素P450基因CYP9A17v2启动子活性分析,S435.622
  19. ABA诱导的OsDMI3基因的表达分析与亚细胞定位,S511
  20. 藤稔葡萄花发育相关基因的克隆及表达分析,S663.1
  21. 根域限制和不同植物生长调节剂对葡萄生长发育的影响,S663.1

中图分类: > 生物科学 > 植物学 > 植物细胞遗传学 > 植物基因工程
© 2012 www.xueweilunwen.com