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ADAM17-siRNA对MCF-7人乳腺癌细胞增殖的影响

作　者: 路延芹
导　师: 赵光明；张雪鹏
学　校: 河北联合大学
专　业: 外科学
关键词: 解聚素-金属蛋白酶17 RNA干扰 乳腺癌 细胞增殖
分类号: R737.9
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要


目的:乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一,近年来其发病率逐年上升。其具体发生机制至今尚未完全清楚,目前公认乳腺癌的发生和发展是一个复杂、多步骤的过程,与许多基因和蛋白的表达相关,包括原癌基因的激活、抑癌基因的突变和丢失等。近年来,对乳腺癌发生、发展中的基因改变和功能分析一直是该领域研究的热点。解聚素-金属蛋白酶(a disintegrin and metalloproteinases,ADAMs)是近年来发现的一类具有多种功能的细胞膜表面糖蛋白家族,大约有800-1200个氨基酸残基组成,通过影响表皮细胞生长因子受体(pidermal Growth Factor Receptor,EGFR )信号转导等多种途径在肿瘤靶向治疗中发挥重要作用。解聚素-金属蛋白酶17(a disintegrin and metalloproteinase 17,ADAM17)是ADAM蛋白家族成员之一,又名肿瘤坏死因子转化酶(Tumor necrosis factor converting enzyme, TACE),已发现其在多种肿瘤中高表达,对肿瘤的发生、发展起重要作用。我们课题组前期的实验结果也显示ADAM17在乳腺纤维腺瘤中呈低表达,而在乳腺癌中呈高表达。RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术是近几年来出现的新的基因沉默技术,相较于反义寡核苷酸技术具有高效、特异、低毒和发挥效应快等优点,在基因阻断方面逐渐替代传统的反义技术。我们通过RNAi使ADAM17基因沉默,观察ADAM17 mRNA表达水平的改变及其对MCF-7人乳腺癌细胞增殖的影响,从而揭示ADAM17与肿瘤细胞增殖的关系,为乳腺癌靶基因治疗提供一些理论及实验依据。方法:本实验以MCF-7人乳腺癌细胞株作为研究对象,观察ADAM17-siRNA转染MCF-7人乳腺癌细胞后对其增殖的影响;利用脂质体介导ADAM17- siRNA转染MCF-7细胞,采用实时荧光聚合酶链反应(Realtime polymerase chain reaction,RT-PCR)检测ADAM17在mRNA转录水平的表达水平;通过绘制细胞生长曲线法、MTT法检测细胞增殖活性;以流式细胞仪检测细胞周期。结果:1. RT-PCR结果显示利用脂质体介导ADAM17-siRNA转染MCF-7细胞后,转染组ADAM17 mRNA表达水平较对照组显著下调,差异具有统计学意义(p<0.05)。2. MTT法及细胞生长曲线显示转染ADAM17-siRNA组的MCF-7细胞增殖能力较对照组显著降低,差异具有统计学意义(p<0.05)。3.流式细胞术检测结果显示,转染组MCF-7细胞生长出现抑制,停滞在G0/Gl期,较对照组显著增加,差异具有统计学意义(p<0.05)。结论:通过脂质体转染法将ADAM17-siRNA转染入MCF-7人乳腺癌细胞后,MCF-7细胞ADAM17 mRNA表达水平明显下调,细胞停滞于G0/G1期,细胞增殖能力明显下降。提示ADAM17在乳腺癌细胞异常增殖中起到重要作用,有可能成为乳腺癌基因治疗的侯选基因,具有潜在的临床应用前景。

全文目录


中文摘要  4-6
英文摘要  6-8
英文缩写  8-9
前言  9-11
材料与方法  11-21
结果  21-23
讨论  23-27
结论  27-28
参考文献  28-32
附表  32-34
附图  34-39
综述 ADAM 蛋白家族与肿瘤的关系  39-56
  参考文献  48-56
致谢  56-57
个人简历  57

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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 泌尿生殖器肿瘤 > 乳腺肿瘤
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