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人外周血淋巴细胞亚群抗肿瘤效应的研究

作　者: 朱仲丽
导　师: 宋文刚; 张明徽
学　校: 泰山医学院
专　业: 免疫学
关键词: 人淋巴细胞亚群细胞治疗抗肿瘤能力 CD8~+CD56~+细胞
分类号: R730.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
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内容摘要

目的对人外周血淋巴细胞各亚群杀伤肿瘤细胞效应进行比较，寻找具有高效杀伤肿瘤细胞能力的细胞亚群，并探索体外优势扩增该群细胞的方法，同时对体外扩增的该细胞亚群的抗肿瘤效应进行分析，从而建立肿瘤细胞治疗的新方法。方法采集健康志愿者的外周血，标记人淋巴细胞谱系标志CD3、CD56、CD8、CD4等对各样本淋巴细胞亚群进行分析和分选。根据自然杀伤细胞(naturalkillercell，NK)细胞和细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxiclymphocyte，CTL)细胞在肿瘤免疫中的作用，本课题关注的淋巴细胞亚群包括CD3~-CD56~+CD8~+细胞、CD3~-CD56~+CD8-细胞、CD3~+CD56~+细胞、CD3~+CD56-CD8~+细胞以及CD3~+CD56-CD8bri细胞。分选的淋巴细胞亚群与8种不同个体、不同组织器官来源的人肿瘤细胞系进行体外共培养实验。通过各淋巴细胞亚群与各肿瘤细胞系的共培养实验体系，寻找到具备高效广谱抗肿瘤能力的淋巴细胞亚群，并借助流式细胞仪对其进行了表型和细胞因子分泌谱的检测。利用现有基础研究成果，通过体外添加白细胞介素2(interleukin-2，IL-2)、同种异体树突状细胞等方式，建立体外扩增该细胞亚群的方法学。扩增后细胞经体外精细亚群分选后培养实验，确定其是否来自于体内原有细胞亚群。最后通过体内和体外抗肿瘤实验，确证体外扩增的该细胞亚群能否保持原有的抗肿瘤效应。结果对人外周血各淋巴亚群体外杀伤肿瘤细胞效应比较的结果表明，每个样本中CD8~+CD56~+细胞对60%以上肿瘤细胞系的杀伤效率最高。流式细胞仪检测结果表明，CD8~+CD56~+细胞活化后可表达CD25和CD69，不表达CD107a，并分泌IL-2、肿瘤坏死因子-α(tumornecrosisfactor-α，TNF-α)和干扰素γ(interferon-γ,IFN-γ)等细胞因子。体外精细亚群分选后培养，表明体外扩增的CD8~+CD56~+细胞仍然来源于原有CD8~+CD56~+细胞亚群。该亚群可通过添加IL-2和同种异体树突状细胞进行体外活化和扩增，且扩增后该亚群对肿瘤细胞系的杀伤能力能够继续保持。体内抗肿瘤实验表明，扩增后CD8~+CD56~+细胞能够有效抑制HepG2肿瘤细胞在裸鼠体内的生长。结论人外周血各淋巴亚群中CD8~+CD56~+细胞杀伤肿瘤效应最强，杀伤肿瘤谱最广。CD8~+CD56~+细胞活化后表达T细胞活化相关标志，分泌IL-2、TNF-α和IFN-γ等细胞因子，但并不表达CD107a，提示其抗肿瘤效应可能通过诱导靶细胞凋亡，而非颗粒酶释放途径。本课题初步建立了CD8~+CD56~+细胞体外活化扩增的方法。通过体外添加同种异体树突状细胞和白介素2，能够显著提高CD8~+CD56~+细胞的扩增能力，并证明扩增后的CD8~+CD56~+细胞来源于原有的CD8~+CD56~+细胞，并能够继续保持其原有高效抗肿瘤能力。

全文目录

中文摘要  4-6
ABSTRACT  6-8
符号说明  8-9
前言  9-16
材料与方法  16-24
结果  24-29
结论  29-30
讨论  30-35
附表  35-38
附图  38-44
参考文献  44-46
综述  46-53
  参考文献  50-53
致谢  53-54
攻读学位期间发表的学术论文  54

人外周血淋巴细胞亚群抗肿瘤效应的研究

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