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UMSCs对急性肝衰竭小鼠的免疫调节作用的研究

作　者: 刘涛
导　师: 秦爱兰
学　校: 苏州大学
专　业: 传染病学
关键词: 脐带间充质干细胞培养急性肝衰竭 IL-4 IFN- PD-1
分类号: R575.3
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
下　载: 11次
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内容摘要

目的建立小鼠脐带间充质干细胞UMSCs的分离、培养和扩增的方法；确定分离、培养的细胞能够稳定传代，有很强的增殖活性，为以后的细胞移植创造了较好的前提条件。采用四氯化碳建立小鼠急性肝衰竭模型，并观察小鼠的一般状况；了解UMSCs移植对急性肝衰竭的疗效，包括肝功能和肝组织病理变化；观察移植前后血清中IL-4和IFN-含量变化；检测不同时间点肝组织中PD-1mRNA的水平变化。方法应用双酶消化法消化C57BL/6孕鼠脐带组织，行贴壁和传代培养，绘制细胞生长曲线和观察细胞形态。用四氯化碳(CCl4)溶于橄榄油,配成浓度为50%的四氯化碳，予3ml/kg分组腹腔注射给药。小鼠分为三组，实验组、移植对照组和空白对照组，分别在7d、14d、21d检测肝功能。血清IL-4和IFN-含量采用酶联免疫吸附实验(ELISA)测定。取不同时间点的肝组织行石蜡切片和HE染色，观察肝脏病理变化情况。RT-PCR检测不同时间点肝组织中PD-1mRNA的水平表达变化。结果1.以胶原酶和胰酶两步消化法对小鼠UMSCs进行了分离培养，获得了成功。两周之后，主要为长梭形或扁平形的成纤维样细胞，细胞呈束状密集平行排列。经过多次消化、传代后，细胞形态仍为长梭状，且形态更加均匀，有很强的增殖活性。群体倍增时间为24h左右。2.成功建立小鼠急性肝衰竭模型。3.移植组小鼠肝功能和造模组比较差异有统计学差异（P＜0.05）。4.移植UMSCs1w、2w、3w后各时间点IL-4和IFN-浓度和造模组比较，IL-4呈上升趋势，而IFN-呈下降趋势。5.UMSCs可改善急性肝衰竭小鼠的炎症浸润，有利于肝小叶结构恢复正常。6.在正常的小鼠肝脏组织中，PD-1有一定的表达，造模组12h、24h、48h PD-1和正常组比较，差异有统计学意义（P＜0.05）。移植UMSCs后24h、48h PD-1和正常组比较，差异无统计学意义(P＞0.05)，和造模组比较，差异有统计学意义（P＜0.05）。结论成功建立了小鼠UMSCs的分离及培养体系，传代培养后仍有较强的增殖能力。UMSCs移植可改善肝衰竭小鼠的存活率、肝功能和肝组织病理变化。UMSCs移植可以反映IL-4和IFN-的抗炎/促炎的平衡关系。PD-1可以抑制正向免疫，可能在急性肝衰竭小鼠和UMSCs移植早期肝脏炎症损伤中发挥重要免疫调控作用。

全文目录

中文摘要  4-6
Abstract  6-9
前言  9-14
  参考文献  11-14
引言  14-15
材料与方法  15-24
结果  24-31
讨论  31-38
结论  38-39
参考文献  39-45
综述  45-61
  参考文献  54-61
中英文对照缩略词表  61-62
攻读硕士专业学位期间发表的论文  62-63
致谢  63-64

UMSCs对急性肝衰竭小鼠的免疫调节作用的研究

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