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大蒜素对大鼠肝星状细胞胶原生成的调节作用

作　者: 刘金玲
导　师: 郑勇；刘清华
学　校: 石河子大学
专　业: 内科学
关键词: 大鼠肝星状细胞大蒜素凋亡细胞增殖肝纤维化
分类号: R575.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

背景：肝病治疗一直是困扰医学界的难题，近几年，肝纤维化的研究对于慢性肝病、肝硬化的形成所拥有的重要研究价值，被医学界所认可，其发生的机制也得有了一定的共识。目前公认的肝纤维化机制，是肝细胞的外基质发生降解减少与过度的沉积所造成的。肝纤维化的研究主要围绕胶原纤维的合成与分解，以及影响胶原合成与分解的因素，以期找到肝纤维化的早期诊断与治疗的办法。其中细胞因子介导细胞与细胞之间、细胞与基质之间的相互作用所引起的肝星状细胞激活肝纤维化过程，是该研究的最关键部分，如果发生反复的肝损伤，可进一步活化HSC。根据临床与实验资料，脂质过氧化产物能更加容易地激活HSC，从而损伤肝细胞。因此，在治疗的过程中使用抗氧化剂，能够对肝损伤以及肝纤维化症状进行减轻。在抗氧化剂中，大蒜素是非常有效的一种，凭着高度的抗氧化能力，在临床与实验中得到广泛的应用。目的：观察大蒜素对大鼠肝星状细胞（HSC-T6）增殖、凋亡的影响，探讨大蒜素抗肝纤维化的作用及其机制。方法：大鼠肝星状细胞株HSC-T6生长于体积分数为10%小牛血清及1×10⁵IU/L的青霉素、100mg/L的链霉素的DMEM培养液中，在37℃、5%CO₂饱和蒸汽的条件下进行培养。分为HSC-T6细胞空白对照组、溶剂对照组、大蒜素药物实验组。大蒜素药物实验组加入不同浓度的DATS。以不加药物而加等体积的10%小牛血清及1×10⁵IU/L的青霉素、100mg/L的链霉素的DMEM培养基为试剂对照组。溶剂对照组加入1.35μl/ml二甲基亚砜。通过MTT法检测大蒜素对大鼠肝星状细胞的增殖的影响；通过BrdU掺入实验检测大蒜素对大鼠肝星状细胞的增殖抑制作用；通过Hoechst33342染色及流式细胞术检测Annexin V-FITC/PI双染检测大蒜素对大鼠肝星状细胞的凋亡作用；透射电镜下观察大蒜素作用后大鼠肝星状细胞的超微结构的变化；Western blot实验鉴定大蒜素作用后大鼠肝星状细胞的Bcl-2、MAO、TIMP-1蛋白的影响。结果：HSC-T6大蒜素DATS各浓度处理组与空白对照组及溶剂对照组比较，增殖抑制率和细胞凋亡率明显增高，有显著性差异（P<0.05）；并且DATS浓度增高时，HSC-T6的抑制率、凋亡率也逐渐增强；DATS高浓度实验组（浓度含量24μg/ml DATS）的增殖抑制率和细胞凋亡率明显高于空白对照组、试剂对照组及低浓度实验组。大蒜素可抑制大鼠肝星状细胞的Bcl-2、MAO、TIMP-1蛋白的生成。结论：大蒜素可以抑制HSC-T6增殖，抑制其凋亡相关蛋白及胶原生成相关蛋白，并诱导其凋亡，且具有时间浓度依赖性。

大蒜素对大鼠肝星状细胞胶原生成的调节作用

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