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大乳头水螅原癌基因c-Myc的克隆、生物信息学分析及原核表达

作　者: 杨好强
导　师: 潘红春
学　校: 安徽师范大学
专　业: 生物化学与分子生物学
关键词: 大乳头水螅 c-Myc基因分子克隆原核表达系统发生
分类号: S917.4
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

原癌基因是参与细胞生长、细胞分裂和细胞分化的正常基因，但当其发生突变后就会变成致癌基因。目前已经已发现100余种原癌基因，其中核酸转录因子c-Myc是许多癌症的致病因子之一。基于2010年完成的低等无脊椎动物水螅基因组计划得到的DNA序列数据进行理论推导，发现水螅具有原癌基因c-Myc类似基因。水螅的原癌基因c-Myc是否也能像高等动物c-Myc一样可以转变为癌基因？水螅的原癌基因c-Myc确切的生理功能是什么？c-Myc在水螅体内的表达是否与水螅较强的再生能力相关？这些疑问亟待解答。鉴于此，我们围绕大乳头水螅 c-Myc基因cDNA序列的克隆开展了如下研究工作：1.运用SMART技术构建了大乳头水螅SMART RACE cDNA文库，通过RT-PCR方法克隆了大乳头水螅c-Myc基因cDNA序列。大乳头水螅c-Myc基因cDNA序列编码区核酸序列全长945bp，编码314个氨基酸，c-Myc蛋白分子由转录激活区和HLH（helix loop helix domain）结构域两部分构成。本研究成功克隆大乳头水螅c-Myc基因cDNA序列为深入探讨水螅c-Myc的功能及系统进化奠定基础。2.依据大乳头水螅c-Myc基因cDNA序列及原核表达质粒pET-LT多克隆位点的特征设计引物，采用PCR方法扩增出带有特殊酶切位点的c-Myc基因cDNA序列，经BamH I和EcoR I双酶切后定向克隆到原核表达质粒pET-LT中，构建原核表达质粒pET-LT-c-Myc，转化大肠杆菌BL21（DE3），异丙基硫代-β-D-半乳糖苷（IPTG）诱导表达。表达产物经SDS-PAGE检测表明，在大肠杆菌中成功表达了重组c-Myc蛋白。重组c-Myc蛋白的成功表达有助于揭示水螅c-Myc蛋白的生理功能及制备c-Myc蛋白抗体等后续工作的开展。

全文目录

摘要  5-6
Abstract  6-8
前言  8-9
第一章原癌基因 c-Myc 研究进展  9-18
  1 引言  9
  2 Myc 活性的调控  9
  3 c-Myc 与细胞的生长和增殖  9-10
  4 c-Myc 与细胞分化  10-11
  5 c-Myc 与细胞凋亡  11-12
  6 c-Myc 与癌症  12-13
  7 c-Myc 的失活与肿瘤消退  13-14
  8 本研究的意义  14
  参考文献  14-18
第二章大乳头水螅原癌基因 c-Myc 基因的克隆及生物信息学分析  18-34
  1 引言  18-19
  2 实验材料与方法  19-21
  3 结果  21-32
  4 讨论  32
  参考文献  32-34
第三章大乳头水螅原癌基因 c-Myc 基因的原核表达  34-42
  1 引言  34-35
  2 实验材料与方法  35-38
  3 结果  38-40
  4 讨论  40-41
  参考文献  41-42
附录：读研期间参与科研项目、论文发表及获奖情况  42-43
致谢  43

大乳头水螅原癌基因c-Myc的克隆、生物信息学分析及原核表达

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