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河南省部分地区羊贾第虫病流行病学调查以及分离株分子特征研究

作　者: 张开放
导　师: 张龙现
学　校: 河南农业大学
专　业: 预防兽医学
关键词: 羊贾第虫流行病学调查季节动态 TPI基因 GDH基因 β-giardin基因 PCR 种系发育
分类号: S858.26
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

贾第虫是一种呈世界性分布的机会性致病肠道原虫,可在人和多种动物之间交叉传播,目前贾第虫已被列为重要的人兽共患寄生虫病之一。根据资料显示,贾第虫是羊最常见肠道寄生虫之一,各年龄段均可感染,但主要引起幼龄羔羊发病,表现为腹泻、胃胀、呕吐等临床症状,严重时可导致死亡。近年来,国外陆续有关于羊贾第虫病的报道,尤其是羔羊感染率较高,并且在羊贾第虫中发现了可以感染人的基因型。从2009年7月到2010年7月,应用卢戈氏碘液染色法对河南省8个地区的6个规模化羊场和3个养殖小区进行了调查,并对中牟某羊场进行了为期一年的季节动态持续研究,并应用基于TPI基因以及GDH基因的PCR方法对羊贾第虫进行了种类鉴定和种系发育分析。1.为了解河南省部分地区羊贾第虫的感染情况和流行特征,于2009年7月到2010年7月,应用卢戈氏碘液染色法对河南省安阳、焦作、新乡、郑州、开封、平顶山、南阳和信阳8个地区的6个规模化羊养殖场和3个羊养殖小区采集羊新鲜粪便共716份。经醛醚沉淀法除脂,卢戈氏碘液染色后,贾第虫为棕黄色,呈卵圆形或椭圆形,囊壁较厚,测量100个包囊,大小为7-11μm×9-15μm,平均大小为9.0μm×12.0μm。囊内轴柱和蜷曲的鞭毛清晰可见。未检查到贾第虫滋养体。通过对采集716份羊粪便样品检查,发现47份羊粪样贾第虫呈阳性,总感染率为6.7%。年龄范围主要集中在6月龄之前,结果分析发现,1-3月龄、3-6月龄羊贾第虫感染率较高,分别为12.4%、13.1%,6月龄以上羊感染率为2.1%,。不同年龄段羊贾第虫感染率存在非常显著的差异。2.为了解河南省羊贾第虫病的季节动态,对中牟地区某羊场的贾第虫感染情况进行了为期一年的跟踪监测。共采集644份样品,发现阳性样品58份,感染率为7.2%,夏季(2009年6月-2009年8月)感染率较高为20.7%,秋季(2009年9月-2009年11月)感染率为4.8%,冬季(2009年9月-2009年11月)感染率为6.2%,春季(2010年3月-2010年5月)未发现贾第虫感染,通过数据分析发现该数据存在显著差异(ρ<0.01)。这表明羊贾第虫的感染率不仅和羊年龄、地区及饲养条件有关,而且很可能与季节有一定的关系。3.为了进一步掌握河南省羊贾第虫的流行率,对查获的共81份羊贾第虫阳性样品进行基于TPI基因,GDH基因以及β-giardin基因进行PCR特异性扩增,TPI基因共有53份羊贾第虫阳性样品扩增出特异性产物,产物序列长度均为530bp。GDH基因共有17份样品扩增出特异性产物,产物序列长度均为450bp。β-giardin基因共有72份样品扩增出特异性产物,产物序列长度均为510bp。4.为确定河南省部分地区羊贾第虫分离株的种类及基因型,对TPI序列扩增出的53个羊贾第虫分离株选择有代表性的34个序列以及GDH的11个序列进行比对,并在NCBI中用Blast搜索相关核酸序列进行同源序列,应用Clustal X1.83等生物学软件对序列进行比对、并构建分子进化树以及进行同源性分析。结果表明,针对TPI基因的34个贾第虫种分离株中有6个在A2的分支中,其余的28份为聚集体E。而基于GDH基因分析与同上述TPI分析一样6份为聚集体A(对应相同的编号),5份为聚集体E。该结果提示,在贾第虫内部存在不同的基因型或基因亚型,并且有同一亚型间也存在碱基差异。通过对河南羊贾第虫的调查分析发现了人兽共患聚集体A2的存在,因此,研究羊贾第虫病具有重要的公共卫生意义。而在国内,尚未有关于羊贾第虫的报道。本研究首次对河南省羊贾第虫分子流行病学和基因型分布情况进行了分析,为进一步研究羊贾第虫病的分子流行病学、生物学特性及虫株之间的种系进化关系等提供了重要的参考依据。

全文目录

致谢  4-7
摘要  7-9
文献综述  9-19
  1.贾第虫概述  9-11
  2.实验室诊断  11-13
  3.分子分型工具  13-15
  4.分子学分类  15-16
  5.流行病学特点  16-17
  6.防治  17-18
  7.展望  18-19
第一部分河南省部分地区羊贾第虫感染情况调查  19-26
  1 引言  19
  2 材料和方法  19-21
  3 结果与分析  21-24
  4 结论与讨论  24-26
第二部分河南省羊贾第虫分离株多位点扩增  26-36
  1 引言  26
  2 TPI 基因位点扩增  26-30
    2.1 材料与方法  26-29
    2.2 结果与分析  29-30
  3 β-giardin 基因位点扩增  30-32
    3.1 材料与方法  30-32
    3.2 结果与分析  32
  4 GDH 基因位点扩增  32-34
    4.1 材料与方法  32-34
    4.2 结果与分析  34
  5 结论与讨论  34-36
第三部分基于多位点的贾第虫种系发育关系研究  36-52
  1 引言  36
  2 基于TPI基因的羊贾第虫种系发育关系研究  36-42
    2.1 材料与方法  36-37
    2.2 结果与分析  37-42
  3 基于β-giardin 基因的羊贾第虫种系发育关系研究  42-46
    3.1 材料与方法  42-43
    3.2 结果与分析  43-46
  4 基于 GDH 基因的羊贾第虫种系发育关系研究  46-50
    4.1 材料与方法  46-47
    4.2 结果与分析  47-50
  5 结论与讨论  50-52
结论和创新点  52-53
  1 结论  52
  2 创新点  52-53
参考文献  53-59
英文摘要  59-60

河南省部分地区羊贾第虫病流行病学调查以及分离株分子特征研究

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