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黑龙江部分奶牛场大肠杆菌耐药性和耐药基因检测分析

作　者: 梁宏儒
导　师: 朱战波
学　校: 黑龙江八一农垦大学
专　业: 预防兽医学
关键词: 牛大肠杆菌药敏实验耐药基因检测分析
分类号: S858.23
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

大肠杆菌是环境中和动物体内的常在菌，致病性的大肠杆菌能够引起犊牛腹泻、肠毒血症和奶牛乳房炎等疾病。开展奶牛源和环境大肠杆菌耐药性调查，了解奶牛养殖场常用抗菌药物，监测牛群大肠杆菌和环境大肠杆菌耐药性的发展变化动态。有利于掌握动物源耐药菌的扩散，对于预防细菌病的爆发有指导意义。本研究共分两部分：（一）采用WHO推荐的纸片扩散法，按NCCLS（2005)判定标准，检测了72株分离自规模化奶牛养殖场（牛群37株，环境35株）的大肠杆菌对15种常用抗菌药物的耐药性，分析比较牛群和环境大肠杆菌对各种抗菌药物的耐药率及多重耐药情况。结果表明牛群和环境分离大肠杆菌对常用抗菌药物的耐药率均以四环素类、磺胺类抗菌药物最高，对多粘菌素B抗菌药物全部敏感。（二）本研究对牛群和环境分离大肠杆菌用常规PCR方法检测了喹诺酮类、氨基糖苷类、氯霉素类、磺胺类和四环素类药物耐药机制相关基因。针对喹诺酮类药物耐药机制检测了GyrA、GyrB和ParC基因，牛群大肠杆菌相应三种基因的扩增阳性检出率分别为27.0％、94.6％和97.3％，其中5株耐药菌株三种基因检出阳性率均为80％；35株环境分离大肠杆菌的检出率则分别为17.1％、97.1％和94.3％。针对氨基糖苷类卡那霉素耐药相关磷酸转移酶Aph（3’）-Ⅱ基因进行检测，牛群和环境中耐药菌株的基因检出阳性率分别为71.4%和66.7%；氨基糖苷类转移酶aadA1和aadB基因在牛群耐药菌株检出阳性率分别为57.1%和42.8%，而环境耐药菌株的检出率分别为33.3%和100%。针对氯霉素类药物耐药相关基因检测了cmlA和floR基因，在牛群大肠杆菌中相应基因检出的阳性率分别是2.7％和8.1％，而在环境大肠杆菌检出率为0。针对磺胺类药物耐药机制检测了sul2基因，在牛群和环境耐药菌株中检出的阳性率分别为27.3%和54.5%。针对四环素类耐药相关TetA基因的检出率为0。综上所述，黑龙江奶牛场的环境和牛群分离大肠杆菌均产生了一定耐药性，并检测到相应耐药基因。实验证实了牛群分离株耐氨基糖苷类的质粒可以传递耐药性。多重耐药菌株的出现势必给临床治疗带来困难。本研究为兽医临床选择有效药物和控制细菌耐药性提供了一定参考依据。

全文目录

摘要  3-4
Abstract  4-8
第一章文献综述  8-19
  1.1 前言  8
  1.2 牛源大肠杆菌的致病性  8-12
  1.3 几种常用抗菌药物的作用机理研究进展  12-18
  1.4 研究目的与意义  18-19
第二章牛场大肠杆菌分离鉴定及耐药性检测分析  19-31
  2.1 材料  19-20
  2.2 方法  20-24
  2.3 结果  24-30
  2.4 讨论  30-31
第三章大肠杆菌耐药基因检测与表型分析  31-50
  3.1 材料  31-32
  3.2 方法  32-33
  3.3 耐药基因的 PCR 扩增  33-39
  3.4 结果  39-47
  3.5 讨论  47-50
第四章结论  50-51
参考文献  51-55
致谢  55-56
附录  56-58
作者简历  58

黑龙江部分奶牛场大肠杆菌耐药性和耐药基因检测分析

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