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牛呼吸道合胞体病毒对小鼠致病性及免疫原性研究

作　者: 杨鸣发
导　师: 侯喜林
学　校: 黑龙江八一农垦大学
专　业: 预防兽医学
关键词: 牛呼吸道合胞体病毒致病性免疫原性昆明小鼠动物模型
分类号: S855.3
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

牛呼吸道合胞体病是由牛呼吸道合胞体病毒（Bovine respiratory syncytial virus，BRSV）引起的一种急性、热性、接触性呼吸道传染病。自1967年在瑞士首次从牛体中分离到BRSV以来，相继在许多养牛业发达的国家都爆发流行此病。目前，国内关于牛呼吸道合胞体病的研究主要集中在病毒的分离、血清型的鉴定、核酸探针的制备、免疫血清学等检测方法，但病毒对牛及实验动物模型的致病性和免疫特性研究还无相关报道。为了进一步深入研究牛呼吸道合胞体病毒的致病性和免疫原性，本实验采用生物医学研究中常用的实验动物昆明小鼠作为研究受试对象，代替较难进行实验环境条件控制的牛进行其致病性和免疫原性研究。在对小鼠致病性研究的试验中，BRSV-HJ分离株通过鼻内接种（TCID-750105.100μL）6~9周龄昆明小鼠，观察记录临诊综合症状，采取肺部和气管组织，通过病毒分离、感染性滴度测定、RT-PCR检测、病理组织切片方法证实病毒对小鼠的致病性。试验结果表明，感染后的小鼠较对照组，精神委顿、体重减轻、呼吸迫促、萎缩一团、严重者出现胸腹式呼吸；小鼠肺部和气管组织上清均能使MDBK细胞产生明显CPE，肺部组织的TCID50滴度高于气管组织；用RT-PCR方法从感染小鼠肺组织中检测出病毒N基因的目的片段；病理学组织变化主要以小鼠支气管腔中有浆液性渗出物，支气管壁因局部充血、水肿和白细胞浸润而变得肿胀增厚，肺泡腔中充满浆液，混有少量中性粒细胞、红细胞和脱落的上皮细胞、肺泡间隔增宽、毛细血管扁平、充血、水肿为主的间质性肺炎。在对小鼠免疫原性研究的试验中，将BRSV-HJ分离株用甲醛灭活，制备弗氏佐剂灭活抗原，通过鼻内和皮下等不同免疫的途径接种昆明小鼠。二免后无菌条件下采取小鼠脾，分离淋巴细胞，进行淋巴细胞增殖实验。二免后14天对小鼠攻毒，攻毒后采取肺部和血清进行中和试验、ELISA方法检测小鼠肺部和血清中IgG、IgA、淋巴细胞Th1/Th2亚群相关细胞因子IFN-γ、IL-5的分泌量。试验结果：二免后淋巴细胞增殖实结果表明，T淋巴细胞增殖能力得到增强，免疫组与对照组相比均有显著性差异(P＜0.05)。小鼠肺部和血清中产生了抗BRSV IgG、IgA、中和抗体。其中血清抗BRSV IgG最高值达到1:12000、IgA最高值1:5000、中和抗体1:20，肺部IgG最高值达到1:2000、IgA最高值1:500、中和抗体1:6。各免疫组肺部和淋巴细胞分泌的IFN-γ和IL-5分泌量与对照组相比差异显著（P＜0.05)；血清中IFN-γ、IL-5分泌量和对照组相比差异不显著（P＞0.05)。结论：BRSV弗氏佐剂灭活抗原鼻内免疫6~9周龄昆明小鼠能在血清和肺部产生抗体滴度，诱导了黏膜免疫、细胞免疫和体液免疫，减少了病毒在小鼠体内的复制与增殖，对小鼠具有保护作用。牛呼吸道合胞体病毒对小鼠致病性和免疫原性研究可为今后深入研究病毒对本体动物的免疫致病性研究提供借鉴和参考。

全文目录

摘要  3-4
Abstract  4-9
第一章文献综述  9-15
  1.1 前言  9
  1.2 病原  9-10
  1.3 流行病学  10-11
  1.4 致病机理  11
  1.5 临床症状  11-12
  1.6 病理变化  12
  1.7 BRSV 的预防与控制  12-13
  1.8 研究的目的与意义  13-15
第二章牛呼吸道合胞体病毒 HJ 分离株感染小鼠致病性研究  15-27
  2.1 材料  15-16
  2.2 方法  16-20
  2.3 结果  20-25
  2.4 讨论  25-27
第三章牛呼吸道合胞体病毒 HJ 分离株对小鼠免疫原性研究  27-42
  3.1 材料  27-28
  3.2 方法  28-33
  3.3 结果  33-40
  3.4 讨论  40-42
第四章结论  42-43
参考文献  43-47
致谢  47-48
作者简介  48

牛呼吸道合胞体病毒对小鼠致病性及免疫原性研究

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