学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

鸡ADSL和GARS-AIRS-GART基因遗传变异、表达及其与肌苷酸的相关分析

作　者: 龚琳琳
导　师: 陈国宏; 常国斌
学　校: 扬州大学
专　业: 动物遗传育种与繁殖
关键词: 鸡 PCR-SSCP ADSL基因 GARS-AIRS-GART基因 IMP 关联分析 组织表达
分类号: S831
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
下　载: 32次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载
 

内容摘要


肌苷酸是影响肉质风味的重要物质基础之一。本研究采用PCR-SSCP和DNA测序相结合研究如皋鸡、安卡鸡、文昌鸡和隐性白羽肉鸡4个群体2个肌苷酸代谢相关候选基因ADSL和GARS-AIRS-GART基因的遗传变异及其与肉质性状的相关性；制作2、4、6、8、10和12周龄如皋鸡和隐性白羽肉鸡胸肌和腿肌肌纤维及脂肪的组织切片,观察和分析不同品种鸡的肌纤维发育规律及其与肉质之间的关系；采用实时荧光定量PCR法研究2个基因(ADSL和GART基因)在0(出雏)、2、4、6、8、10和12周龄如皋鸡和隐性白羽肉鸡10个组织(大脑、心、肝、胸肌、腿肌、小脑、腺胃、肾、大肠和小肠)的表达差异及不同发育时期的表达规律,期望对优质鸡的遗传改良工作提供参考依据,主要结果如下：1.组织切片结果显示隐性白羽肉鸡肌肉纤维的直径在每个周龄上都高于如皋鸡,且在4和6周龄时达到了极显著的水平(P<0.01),在12周龄时达到了显著的差异(P<0.05),这与隐性白羽肉鸡生长发育速度快于如皋鸡,饲料利用率高的种质特性相一致。而隐性白羽肉鸡和如皋鸡的皮下脂肪细胞体积变化均呈现“上升-下降”的趋势,分别在8周龄和10周龄出现下降趋势,在6周龄和8周龄时隐性白羽肉鸡高于如皋鸡,而10周龄和12周龄时低于如皋鸡,但差异并不显著(P>0.05)。2. ADSL基因遗传变异及其与IMP的关联分析在文昌、如皋、安卡鸡和隐性白羽肉鸡的ADSL基因2号外显子上检测到g.3713G>A和g.3797C>T的同义突变,在9号外显子上检测到g.10191C>T的同义突变。其中文昌鸡在10191位点处于Hardy-Weinberg非平衡状态,其余位点在四个鸡种中都处于哈代-温伯格平衡状态。与肌肉肌苷酸含量的关联分析表明：在2号外显子中的2个SNPs位点,基因型效应、品种效应以及品种与基因型的互作效应均不显著(P>0.05)；而在9号外显子的多态位点上检测出显著的基因型效应,BB型个体胸肌IMP含量分别较AA型与AB型低1.149mg/g和1.181mg/g,且差异极显著(P<0.01)；AB型个体IMP含量稍高于AA型,但二者之间差异不显著(P>0.05)。3. GARS-AIRS-GART基因遗传变异及其与IMP的关联分析如皋、文昌、安卡鸡和隐性白羽肉鸡GARS-AIRS-GART基因21号外显子中共发现了4个SNPs:g.29943G>A、g.29968C>T、g.30011T>C、g.30017C>T,其中三处为非同义突变,29943处天冬氨酸(Asp)→天冬酰胺(Asn)、30011处色氨酸(Trp)→精氨酸(Arg)、30017处精氨酸(Arg)→半胱氨酸(Cys)。安卡、文昌和如皋鸡都处在Hardy-Weinberg平衡状态。该多态位点上存在显著的基因型效应,与肌肉肌苷酸含量的关联分析结果表明：AE型个体胸肌IMP含量比其他基因型的IMP含量都低,均达到了极显著水平(P<0.01),其他基因型之间IMP含量差异均不显著(P>0.05)。4. ADSL和GARS-AIRS-GART基因候选单倍型分析在ADSL和GARS-AIRS-GART基因编码区中共检测到128种候选单倍型,其中1、21和37号候选单倍型的频率超过了10%,分别为0.5021、0.1316和0.3159；2、3、5、6、13、31、33、38、39、53、65、85、101号候选单倍型的频率在1%～10%之间；其余都小于1%。不同单倍型频率分布的差异可能是由于单核苷酸多态位点间连锁不平衡引起。本实验的四个鸡种中,所检测到的候选单倍型安卡鸡最多为80种；隐性白羽肉鸡最少为8种；如皋鸡和文昌鸡居中,分别为32种和62种；而且候选单倍型种类和频率也各不相同；反映了不同鸡种的遗传结构差异。5.如皋鸡、隐性白羽肉鸡ADSL基因的组织表达规律分析实时荧光定量PCR法检测结果表明：ADSL基因在腿肌和胸肌中表现为高度特异性表达,肝、肾和心表现为中度表达,小脑、大脑、腺胃、小肠和大肠表现为低度表达。各组织之间的表达规律如下：①大脑组织中两鸡种不同时期的表达变化规律相似,均表现为从0日龄上升到4周龄,随后逐渐减少；②心脏组织中如皋鸡在2周龄时表达量达到最高,之后逐渐下降；而隐性白羽肉鸡出生时(0日龄)基因的表达量较高,随后逐渐减少,在8周龄时到达最高；③肝脏组织中,如皋鸡从出生后到2周龄时表达量一直上升至最大值,随后逐渐下降,12周龄时又有所上升；而隐性白羽肉鸡出生时的表达量较高,随后逐渐减少；④胸肌组织中,如皋鸡从出生后到12周龄内最高表达量出现在2周龄且如皋公鸡的表达量明显高于母鸡；而隐性白羽肉鸡的最高表达量出现在6周龄；⑤腿肌组织中,2个品种的公鸡的表达量先上升后下降的趋势,而母鸡呈先下降后上升趋势。6.如皋鸡、隐性白羽肉鸡GART基因的组织表达规律分析GART基因在如皋鸡的肝脏和腿肌表现为高度表达,小脑、腺胃、胸肌、心和肾都表现为中度表达,大肠、小肠和大脑表现为低度表达。各组织的表达量如下：①在腿肌组织中,两鸡种公鸡GART基因的发育性表达规律相似,均表现从0日龄开始上升到2周龄到达最大值,随后逐渐下降,但如皋鸡公鸡2周龄的表达量远远高于隐性白羽肉鸡的公鸡；且两鸡种母鸡各个时期的表达量也相似。到12周龄时如皋公鸡和母鸡的表达量都具有上升的趋势,而隐性白羽肉鸡的公鸡和母鸡的表达量都具有下降的趋势；②在胸肌中,两鸡种GART基因表达量均随日龄的增加而降低；0～4周龄如皋鸡表达量高于隐性白羽肉鸡,4～8周龄则低于隐性白羽肉鸡；之后的表达量又高于隐性白羽肉鸡；③心脏组织检测结果为母鸡的表达量在0～2周龄急速下降,而公鸡的表达量在0～2周龄有所上升；4～12周龄公母都维持在相对稳定的水平；④肝脏组织检测结果为如皋鸡0～2周龄母鸡的表达量高于公鸡,4～12周龄公鸡的表达量高于母鸡；而隐性白羽肉鸡0～12周龄公鸡的表达量都高于母鸡。

全文目录


摘要  3-6
ABSTRACT  6-13
第一章 文献综述  13-29
  1 肉品风味  13-17
    1.1 肉品风味的概念  13-15
    1.2 香味呈味物  15-17
  2 影响禽肉风味的因素  17-21
    2.1 日龄  18
    2.2 品种  18-19
    2.3 性别  19
    2.4 日粮  19-20
    2.5 肉品的贮藏条件  20-21
  3 肌苷酸的研究现状  21-22
    3.1 发展历史  21-22
    3.2 肌苷酸的特性研究  22
    3.3 肌苷酸的合成、代谢  22
  4 实时荧光定量PCR分析技术  22-28
    4.1 实时荧光定量PCR的原理  25-26
    4.2 实时荧光定量PCR的定量方法  26-27
      4.2.1 标准曲线法的相对定量  26
      4.2.2 标准曲线法的绝对定量  26
      4.2.3 比较Ct法的相对定量  26-27
    4.3 荧光定量PCR技术的应用  27-28
  5 本研究的目的和意义  28-29
第二章 如皋鸡和隐性白羽肉鸡肌肉和脂肪性状的发育性变化研究  29-39
  1 引言  29
  2 材料与方法  29-32
    2.1 试验群体  29
    2.2 试验方法  29-32
  3 统计方法  32
  4 数据分析  32
  5 结果与分析  32-37
    5.1 组织切片(H&E染色)  32-34
    5.2 品种和时间对肌肉和脂肪性状的影响  34-36
    5.3 品种内周龄间、相同周龄品种间肌肉和脂肪性状的比较  36-37
  6 讨论  37-39
    6.1 两鸡种生长性能的差异  37-38
    6.2 两鸡种脂肪沉积的差异及可能原因  38-39
第三章 鸡ADSL和GARS-AIRS-GART基因的单核苷酸多态性及其与肌肉IMP含量的关联分析  39-61
  1 引言  39
  2 材料与方法  39-44
    2.1 实验动物  39
    2.2 主要溶液的配制  39-41
    2.3 引物设计合成  41
    2.4 主要实验步骤  41-44
  3 相关软件与统计方法  44-45
    3.1 相关软件  44-45
    3.2 统计方法  45
  4 结果与分析  45-58
    4.1 ADSL基因部分外显子PCR-SSCP结果  45-50
      4.1.1 ADSL基因外显子2 PCR-SSCP结果  45-47
      4.1.2 ADSL基因外显子9 PCR-SSCP结果  47-48
      4.1.3 三个SNPs位点基因频率和基因型频率及在三个鸡品种中的遗传特性  48-49
      4.1.4 ADSL基因与12周龄胸肌肌苷酸含量的关联分析  49-50
    4.2 GARS-AIRS-GART基因部分外显子PCR-SSCP结果  50-54
      4.2.1 GARS-AIRS-GART基因21号外显子PCR-SSCP结果  50-52
      4.2.2 四个SNPs位点基因频率和基因型频率及在三个鸡品种中的遗传特性  52-53
      4.2.3 GARS-AIRS-GART基因与12周龄胸肌肌苷酸含量的关联分析  53-54
    4.3 鸡ADSL和GARS-AIRS-GART基因单倍型分析  54-58
  5 讨论  58-61
    5.1 鸡ADSL基因单核苷酸多态性及其与肌肉肌苷酸含量的关系  58-59
    5.2 鸡GARS-AIRS-GART基因单核苷酸多态性及其与肌肉肌苷酸含量的关系  59-60
    5.3 鸡ADSL和GARS-AIRS-GART基因单倍型研究  60-61
第四章 鸡ADSL和GART基因的表达调控  61-85
  1 引言  61
  2 材料与方法  61-66
    2.1 试验材料  61-62
      2.1.1 试验样品  61
      2.1.2 主要仪器  61-62
      2.1.3 主要试剂  62
    2.2 试验方法  62-65
      2.2.1 引物设计  62-63
      2.2.2 RNA提取、纯化和反转录  63-64
      2.2.3 常规PCR对引物进行检测  64-65
      2.2.4 实时荧光定量PCR检测  65
      2.2.5 肌苷酸含量的测定  65
    2.3 统计分析  65-66
  3 结果与分析  66-81
    3.1 荧光定量PCR引物常规PCR检测  66
    3.2 目的基因与内参基因的溶解曲线  66-68
    3.3 2个目标基因在如皋鸡和隐性白羽肉鸡中的表达规律  68-78
      3.3.1 ADSL基因的表达规律  68-73
      3.3.2 GART基因的表达规律  73-78
    3.4 2个基因的表达调控关系  78-80
    3.5 2?12周龄如皋鸡和隐性白羽肉鸡肌音酸含量比较  80-81
  4 讨论  81-85
    4.1 ADSL基因的表达  81-82
    4.2 GART基因的表达  82-83
    4.3 2个基因的表达调控探讨  83
    4.4 胸肌肌苷酸含量与ADSL基因和GART基因表达间的关系  83-85
全文结论  85-88
参考文献  88-97
致谢  97-98
研究生期间发表的论文  98-99

相似论文

  1. 外来入侵植物加拿大一枝黄花对入侵地土壤动物群落结构的影响,S451
  2. 低蛋白日粮添加合成氨基酸和小肽对肉仔鸡的影响,S831.5
  3. 调和玉米油对肉仔鸡抗氧化应激、脂质代谢酶及免疫基因表达的影响,S831.5
  4. 转基因水稻对肉仔鸡饲用安全性研究,S831.5
  5. 粳稻穗角性状的遗传分离分析和QTL定位及关联分析,S511.22
  6. 鸡Δ~6脂肪酸脱氢酶基因启动子区域多态性及基因时空表达的研究,S831
  7. 不同处理血粉的营养价值评定及其在肉仔鸡饲粮中的应用研究,S831.5
  8. 鸭ADSL与PurH基因序列特征及表达与肌肉肌苷酸（IMP）含量的相关性分析,S834
  9. 环境内分泌干扰素氰戊菊酯对鸡繁殖性能的影响,S831.5
  10. 鸡CFL2基因遗传变异及其效应与表达的研究,S831
  11. 鸭源鸡杆菌抗体消长规律研究及抗脂多糖单抗杂交瘤细胞株的建立,S858.32
  12. 拟南芥GEF家族在各组织中的表达及其对非生物胁迫的反应研究,Q945.78
  13. 甜菜夜蛾与斜纹夜蛾触角细胞色素P450及酯酶基因cDNA片段的克隆和组织表达分析,S433.4
  14. 烟夜蛾气味受体基因和精氨酸激酶基因的克隆与表达分析,S433.4
  15. 曲靖清香型烤烟风格形成的土壤因素和烟叶品质特点分析,S572
  16. 中国大豆地方品种群体的遗传结构和连锁不平衡特征及主要育种性状QTL的关联分析,S565.1
  17. 陆地棉雄蕊发育耐高温种质资源筛选及农艺性状与SSR标记关联分析,S562
  18. 我国栽培大豆品种的遗传多样性分析与青籽粒性状QTL的关联定位,S565.1
  19. 苏钟猪TLR4基因多态性及编码区C1027A功能分析,S828
  20. 鸡传染性法氏囊病毒颗粒疫苗的研制及其免疫效果的研究,S858.31
  21. 人源志贺菌对SPF雏鸡、鸡肠上皮原代细胞的侵袭性及肠组织CD44分子的时空性表达研究,S855.1

中图分类: > 农业科学 > 畜牧、动物医学、狩猎、蚕、蜂 > 家禽 > 鸡
© 2012 www.xueweilunwen.com