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Lb-FABP和L-FABP与鸡生长和体组成性状的关联及其配基结合属性研究

作　者: 赵玉芳
导　师: 李辉
学　校: 东北农业大学
专　业: 动物遗传育种与繁殖
关键词: 鸡 L-FABP基因 Lb-FABP基因多态性配基结合属性
分类号: S831
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

脂肪酸结合蛋白（FABPs）属于脂质结合蛋白的超家族成员，其分子量较小并对脂肪酸具有高度亲和力，对脂类代谢具有极为重要的调控作用。本研究对以东北农业大学肉鸡高、低腹脂双向选择品系和F2资源群体为实验材料，采用测序、飞行质谱法等方法检测鸡肝脏基础型脂肪酸结合蛋白（Lb-FABP）和肝脏型脂肪酸结合蛋白（L-FABP）基因的多态性，分析高、低脂系第十四世代两系间等位基因频率的变化规律，并进行了基因多态性与鸡生长和体组成性状的相关分析。同时，对Lb-FABP和L-FABP的配基结合属性进行了研究。主要研究结果如下：（1）通过测序，在Lb-FABP基因上共检测到了4个SNP位点，其中5’调控区3个、内含子1中1个，3’调控区和编码区没有发现SNP。在L-FABP中共检测到了17个SNP位点，其中5’调控区16个、编码区1个，3’调控区和内含子没有发现SNP。利用网上提供的SNP信息(www.genome.ucsc.edu)及多态性检测结果，共选择Lb-FABP基因的5个SNP（SNP1-SNP5）和L-FABP基因的15个SNP（SNP6-SNP20）在肉鸡高、低脂系和F2资源群体中进行个体基因型分析。(2)在高低脂系第十四世代群体中，Lb-FABP基因的SNP1对3，5周龄的体重有显著影响（P<0.05），SNP2对3，5周龄的体重和腹脂率有显著影响（P<0.05）， SNP3对3周龄的体重，腹脂重和腹脂率有显著影响（P<0.05）；L-FABP基因的SNP7，SNP8，SNP19，SNP20位点对鸡的睾丸重和睾丸比率有极显著的影响（P<0.01）。(3)在F2群体中，Lb-FABP基因的SNP1变异位点对鸡的出生重，6，9，10，11周龄的体重，屠体重，腺胃重和腺胃比率有显著影响（P<0.05）， SNP2对鸡的出生重，6，9，10，11，12周龄的体重，屠体重，腺胃重和腺胃比率有显著影响（P<0.05），SNP3对3，6，7，8，9，10，11，12周龄的体重有显著影响（P<0.05）；L-FABP基因的SNP15位点对鸡的7，8，9，10，11，12周龄的体重有显著或极显著的影响（P<0.01，P<0.05）。(4)在高低脂系第十四世代群体中，Lb-FABP基因3个SNPs构成的二倍体基因型（GCC/GCC，GCC/GCT，GCC/TTC，GCT/GCT，GCT/TTC）对3，5周龄的体重有显著影响（P<0.05），对其它性状并无显著的影响(P>0.05)。在F2群体中，Lb-FABP基因3个SNPs构成的二倍体基因型（GCC/GCC，GCC/GCT，GCC/TTC，GCT/GCT，GCT/TTC，TTC/TTC）对6，7，9，10，11，12周龄的体重有显著影响（P<0.05），对其它性状无显著影响(P>0.05)。(5)鸡的Lb-FABP和L-FABP蛋白分别与1,8-ANS探针结合，分析结果显示Lb-FABP蛋白的表观解离常数Kd=4.71，L-FABP蛋白的表观解离常数Kd=1.95，L-FABP的配基结合能力高于Lb-FABP蛋白。（6）Lb-FABP和L-FABP蛋白分别棕榈酸、花生四烯酸、油酸、胆汁酸和维甲酸结合能力分析结果显示，鸡Lb-FABP蛋白结合维甲酸的能力最强（Ki=0.30），而L-FABP蛋白结合油酸的能力最强（Ki=1.56）。

全文目录

摘要  9-11
Abstract  11-13
1 引言  13-19
  1.1 研究背景与科学意义  13
  1.2 文献综述  13-16
    1.2.1 FABPs 家族概述  14-15
    1.2.2 L-FABP 基因研究进展  15-16
    1.2.3 Lb-FABP 基因研究进展  16
  1.3 本研究的目标和内容  16-19
    1.3.1 研究目标  16-17
    1.3.2 研究内容  17
    1.3.3 研究方案  17-19
2 材料与方法  19-24
  2.1 试验材料  19-20
    2.1.1 试验动物  19
    2.1.2 性状测定  19
    2.1.3 菌株和载体  19
    2.1.4 药物和酶  19-20
    2.1.5 主要仪器  20
    2.1.6 主要分子生物学软件  20
  2.2 试验方法  20-24
    2.2.1 缓冲液与常用试剂的配制  20-21
    2.2.2 血样采集及 DNA 提取  21
    2.2.3 引物的设计与合成  21-22
    2.2.4 统计模型建立  22
    2.2.5 目的蛋白纯化  22-23
    2.2.6 配基结合特性测定  23-24
3 结果与分析  24-39
  3.1 鸡 Lb-FABP 和 L-FABP 基因的 SNPs 的发现及命名  24-25
    3.1.1 鸡 Lb-FABP 基因的 SNPs 的发现及命名  24-25
    3.1.2 鸡 L-FABP 基因的 SNPs 的发现及命名  25
  3.2 Lb-FABP 和 L-FABP 基因基因型和等位基因频率分析  25-27
  3.3 Lb-FABP 和 L-FABP 基因的连锁不平衡程度（LD）分析  27-30
    3.3.1 Lb-FABP 基因的连锁不平衡程度（LD）分析  27
    3.3.2 L-FABP 基因的连锁不平衡程度（LD）分析  27-30
  3.4 Lb-FABP 和 L-FABP 基因多态性位点与鸡生长和体组成性状的相关分析  30-35
    3.4.1 Lb-FABP 基因多态性位点与鸡生长和体组成性状的相关分析  30-32
    3.4.2 Lb-FABP 基因二倍体基因型与鸡生长和体组成性状的相关分析  32-33
    3.4.3 L-FABP 基因多态性位点与鸡生长和体组成性状的相关分析  33-35
  3.5 鸡 Lb-FABP 和 L-FABP 配基结合属性研究  35-39
    3.5.1 GST/Lb-FABP 和 GST/L-FABP 融合蛋白的诱导表达及纯化  35-36
    3.5.2 1,8-ANS 结合分析  36
    3.5.3 配基置换分析  36-39
4 讨论  39-42
  4.1 鸡 Lb-FABP 和 L-FABP 基因多态性位点与鸡生长和体组成性状的相关分析  39-40
    4.1.1 鸡 Lb-FABP 基因多态性位点与生长和体组成性状的相关分析  39
    4.1.2 鸡 L-FABP 基因多态性位点与生长和体组成性状的相关分析  39-40
  4.2 鸡 Lb-FABP 和 L-FABP 蛋白配基结合特性研究  40-42
    4.2.1 鸡的 Lb-FABP 和 L-FABP 融合蛋白的制备  40
    4.2.2 鸡的 Lb-FABP 和 L-FABP 与 1,8-ANS 结合分析  40-41
    4.2.3 鸡的 Lb-FABP 和 L-FABP 配基置换分析  41-42
5 结论  42-43
展望  43-44
致谢  44-45
参考文献  45-51
攻读硕士学位期间发表的学术论文  51

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