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大豆非生物胁迫诱导的四个MYB基因克隆及表达分析

作　者: 刘晋跃
导　师: 刘宝辉
学　校: 中国科学院研究生院（东北地理与农业生态研究所）
专　业: 生态学
关键词: 大豆非生物胁迫 GmMYB 芽期克隆表达分析
分类号: S565.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
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内容摘要

植物受到各种逆境胁迫时，相关应答基因被诱导表达，进而产生适应性变化。本实验室利用一段抗逆的EST序列（259bp，未公布），与大豆全基因组数据库进行Blast比对，获得四个高度相似的基因序列Gm02g01300、Gm03g38040、Gm10g01340和Gm19g40650。从栽培大豆东农42、黑农35、合丰25中克隆到这四个开放阅读框均由三个外显子和两个内含子间隔构成的R2R3-MYB基因，其中Gm02g01300、Gm03g38040和Gm10g01340与已公布的Williams82基因组序列完全一致，Gm19g40650的测序结果较预测的cDNA序列在第一和第二外显子间插入了30bp核苷酸，而且第375位的单核苷酸突变导致多肽链第125位的氨基酸发生置换（GAG375→GAC375，E125→D125）。确定适宜的非生物胁迫因子（低温、干旱、盐和碱），人工气候箱内模拟非生物胁迫对栽培大豆黑农35苗期或东农42芽期的效应，选择适宜时间点，采用半定量RT-PCR或荧光定量PCR技术，检测R2R3-MYB基因的表达。结果表明，大豆苗期Gm03g38040受干旱胁迫强烈诱导表达；大豆芽期受到各种非生物胁迫时，4个基因的表达水平都存在明显波动，呈诱导后短暂上调或下调表达两种模式，但基因表达时间、强度和趋势存在明显差异；Gm02g01300明显受干旱诱导，Gm03g38040在多种胁迫条件下被强烈诱导表达，表明它们可能在大豆非生物胁迫的调控中起到重要作用；在子叶与胚间，单个基因的表达也存在差异；多种非生物胁迫条件下，四个基因的表达不仅存在时空差异，可能也具有调控模式的差异。

全文目录

摘要  5-6
Abstract  6-7
目录  7-9
第一章绪论  9-17
  第一节研究目的和意义  9
  第二节国内外研究动态  9-15
  第三节研究内容  15
  第四节总体技术路线  15-17
第二章实验材料和方法  17-25
  第一节大豆基因组 DNA 的提取  17
  第二节大豆 MYB 基因的克隆  17-18
  第三节大豆苗期、芽期非生物胁迫条件的设定  18-19
  第四节总 RNA 的提取纯化和 cDNA 第一链的合成  19-21
  第五节不同大豆品种中四个 GmMYB 基因 cDNA 序列克隆  21
  第六节拟南芥表达载体构建与转基因  21-23
  第七节 MEGA4.0 构建系统发生树  23
  第八节四个 GmMYB 基因表达模式分析  23-25
第三章结果与分析  25-49
  第一节不同大豆品种的耐逆性分析  25-29
  第二节四个 GmMYB 基因的克隆与分析  29-37
  第三节 MEGA 4.0 构建 GmMYB 蛋白系统发生树  37-40
  第四节拟南芥表达载体构建与转基因  40-41
  第五节干旱胁迫下 Gm03g38040 和 Gm19g40650 表达分析  41-44
  第六节逆境胁迫下四个 GmMYB 基因的表达模式分析  44-49
第四章结论  49-50
第五章讨论与展望  50-53
  第一节讨论  50-51
  第二节展望  51-53
参考文献  53-60
攻读学位期间发表的学术论文  60-61
致谢  61

大豆非生物胁迫诱导的四个MYB基因克隆及表达分析

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