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神经修复对产瘫近端神经元影响机制的实验研究

作　者: 傅阳
导　师: 陈亮；胡韶楠；董震
学　校: 复旦大学
专　业: 外科学
关键词: 臂丛 神经损伤 神经元 凋亡 胆碱酯酶 酸性磷酸酶 胶质细胞源性神经营养因子 实时定量RT-PCR 手术时机
分类号: R726.5
类　型: 博士论文
年　份: 2006年
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内容摘要


第一部分幼年大鼠神经根断裂后移植修复对神经元存活影响的研究目的研究幼年大鼠臂丛神经根损伤后早期神经移植手术对脊髓前角运动神经元和背根神经节感觉神经元存活的影响，探讨早期臂丛修复对产瘫近端神经元影响作用的形态学基础。方法取SPF级Sprague-Dawley幼年大鼠(生后18天，下同)24只，等分为2组：神经根切断组和神经根修复组。采用True Blue注射法逆行标记近端神经元。神经根切断组将右侧颈5神经根切除0.3cm；神经根修复组将颈5切除一段后即取自体腓肠神经行移植修复(0.3cm×3股)。术后4周取颈5脊髓前角和背根神经节，应用TUNEL法检测凋亡的运动及感觉神经元，比较两组近端神经元及凋亡细胞数量的差异。结果术后4周，神经根修复组及切断组脊髓前角True Blue标记的运动神经元分别为1495±645.1和656±160.6个，背根神经节中True Blue标记的感觉神经元分别为3415±1251.9和406±190.4个。神经根修复组运动和感觉神经元数量明显多于神经根切断组，两组差异有统计学意义(运动神经元t值为3.09，P＜0.05：感觉神经元t值为5.82，P＜0.01)。TUNEL检测结果显示术后4周两组大鼠近端神经元均存在不同程度的凋亡。神经根修复组及切断组脊髓前角运动神经元凋亡细胞分别为85±3.9和136±44.2个，背根神经节感觉神经元凋亡细胞分别为345±113.4和618±87.0个。神经根修复组运动和感觉神经元凋亡细胞明显少于神经根切断组，两组差异有统计学意义(运动神经元t值为2.79，P＜0.05；感觉神经元t值为4.68，P＜0.01)。结论幼年大鼠神经根损伤后即行修复手术可明显减少近端运动和感觉神经元死亡，提示早期臂丛修复对产瘫近端神经元有保护作用。第二部分幼年大鼠神经根断裂后移植修复对神经元影响机制的研究目的观察幼年大鼠神经根损伤后即行神经移植手术对神经元退变程度、神经营养因子及其受体数量的影响，从细胞水平探索早期臂丛修复对产瘫近端神经元的保护机制。方法取SPF级Sprague-Dawley幼年大鼠36只，等分为2组：神经根切断组和神经根修复组。神经根切断组将右侧颈5神经根切除0.3cm；神经根修复组将颈5切除一段后即取自体腓肠神经行移植修复(0.3cm×3股)。术后4周取颈5脊髓前角和背根神经节，行酶组织化学染色分析神经元胆碱酯酶(CHE)和酸性磷酸酶(ACP)阳性颗粒的平均灰度及面积百分率，行免疫组织化学染色检测神经元中胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)及其受体GFRα1免疫阳性颗粒的数量，并比较两组间的差异。结果术后4周，神经根修复组及切断组运动神经元CHE阳性颗粒平均灰度分别为29.1±4.21和23.5±4.60，面积百分率分别为46.4±3.45％和41.5±3.03％；感觉神经元CHE阳性颗粒平均灰度分别为43.3±3.04和34.8±2.40，面积百分率分别为68.6±3.86％和53.9±2.56％。神经根修复组运动和感觉神经元CHE阳性颗粒平均灰度及面积百分率均高于神经根切断组，两组差异有统计学意义(运动神经元两指标t值分别为2.23和2.60，P均＜0.05；感觉神经元两指标t值分别为5.40和5.53，P均＜0.01)。神经根修复组及切断组运动神经元ACP阳性颗粒平均灰度分别为41.5±3.51和52.4±6.08，面积百分率分别为115.5±9.74％和135.9±7.88％；感觉神经元ACP阳性颗粒平均灰度分别为55.0±2.19和60.9±2.74，面积百分率分别为162.1±19.65％和255.5±36.41％。神经根修复组运动和感觉神经元ACP阳性颗粒平均灰度及面积百分率均低于神经根切断组，两组差异有统计学意义(运动神经元两指标t值分别为3.79和3.98，P均＜0.05；感觉神经元两指标t值分别为4.15和5.53，P均＜0.01)。免疫组织化学检测显示神经根修复组运动和感觉神经元GDNF免疫阳性颗粒数目分别为786.3±176.84和2997.0±357.99个，神经根切断组运动和感觉神经元阳性颗粒数目分别为335.0±49.50和1632.0±305.55个，两组差异有高度统计学意义(运动和感觉神经元t值分别为6.02和7.10，P均＜0.01)。神经根修复组运动和感觉神经元GFRα1免疫阳性颗粒数目分别787.5±178.55和3111.0±445072个，神经根切断组运动和感觉神经元阳性颗粒数目分别为397.3±41.78和1588.3±229.00个，两组差异有高度统计学意义(运动和感觉神经元t值分别为5.21和7.44，P均＜0.01)。结论幼年大鼠早期神经根修复对近端神经元的保护作用与神经元退变程度减轻、代谢功能改善、GDNF及其受体GFRα1数量增加有关。第三部分幼年大鼠神经根断裂后移植修复对神经元凋亡基因表达影响的研究目的观察幼年大鼠神经根损伤后即行神经移植修复对近端神经元C-Jun和Bcl-2表达水平的影响，从分子水平探讨早期臂丛修复手术对产瘫近端神经元保护作用的原因。方法取SPF级Sprague-Dawley幼年大鼠12只，等分为2组：神经根切断组、神经根修复组。神经根切断组将右侧颈5神经根切除0.3cm；神经根修复组将颈5切除一段后即取自体腓肠神经行移植修复(0.3cm×3股)。术后4周取颈5脊髓前角和背根神经节，通过实时定量逆转录-聚合酶链式反应(Real Time RT-PCR)检测大鼠近端神经元C-Jun、Bcl-2 mRNA的表达水平，并比较两组间的差异。结果术后4周，实时定量RT-PCR检测显示神经根修复组脊髓前角运动神经元和背根神经节感觉神经元C-Jun mRNA的表达量分别为7.8±2.32和4.5±1.05 copies，神经根切断组运动和感觉神经元C-Jun mRNA的表达量分别为34.2±9.15和7.0±1.10 copies，两组差异有高度统计学意义(运动和感觉神经元t值分别为6.83和4.04，P均＜0.01)。神经根修复组运动和感觉神经元Bcl-2 mRNA的表达量分别1252.3±66.31和725.5+100.27 copies，神经根切断组运动和感觉神经元Bcl-2 mRNA的表达量分别843.3±162.46和433.3±98.93 copies，两组差异有高度统计学意义(运动和感觉神经元，值分别为5.71和5.08，P均＜0.01)。结论幼年大鼠经早期神经根修复后其近端神经元C-Jun表达量增加、Bcl-2表达量减少，表明凋亡基因表达水平变化是早期臂丛修复手术保护近端神经元的分子机制。第四部分幼年大鼠神经根断裂后不同时间的移植修复对神经元影响的研究目的研究幼年大鼠神经根切断后不同时间的神经移植修复对近端感觉及运动神经元存活数量的影响，为临床上确立产瘫的最佳手术时机提供相关实验基础。方法取SPF级Sprague-Dawley幼年大鼠48只，随机等分为8组。一组为单纯切断组，余7组分别为：立即修复组和3、6、9、12、15、18天修复组。采用True Blue注射法逆行标记神经元。单纯切断组将右侧颈5神经根切除0.3cm；立即修复组将颈5切除一段后即取自体腓肠神经行移植修复(0.3cm×3股)。其余各组分别在颈5切断后间隔相应时间修复神经根。术后4周取颈5脊髓前角和背根神经节，比较各组运动和感觉神经元存活的数量。结果幼年大鼠颈5切断后，3、6天修复组与立即修复组近端神经元计数结果的差异无统计学意义(P均＞0.05)，上述三组神经元数量较单纯切断组显著增多(P均＜0.05)。与立即修复组相比，9天修复组近端感觉神经元数量明显减少(P＜0.05)，但运动神经元数量无显著差异(P＞0.05)。单纯切断组和15、18天修复组近端神经元数量的差异无统计学意义(P均＞0.05)。结论幼年大鼠神经根损伤后，在0～9天(相当于人类0～6个月)内修复对近端神经元可产生较满意的保护作用，且呈越早手术疗效越显著的趋势。这提示临床上对有手术指征的产瘫应争取在出生后6个月内手术，以挽救近端神经元，从而为神经再生创造良好基础。

全文目录


中文摘要  5-9
英文摘要  9-15
前言  15-22
  参考文献  18-22
第一部分 幼年大鼠神经根断裂后移植修复对神经元存活影响的研究  22-33
  材料与方法  22-24
  结果  24-26
  讨论  26-27
  结论  27-28
  参考文献  28-31
  附图  31-33
第二部分 幼年大鼠神经根断裂后移植修复对神经元影响机制的研究  33-53
  材料与方法  33-36
  结果  36-40
  讨论  40-42
  结论  42-43
  参考文献  43-47
  附图  47-53
第三部分 幼年大鼠神经根断裂后移植修复对神经元凋亡基因表达影响的研究  53-70
  材料与方法  53-57
  结果  57-59
  讨论  59-60
  结论  60-61
  参考文献  61-64
  附图  64-70
第四部分 幼年大鼠神经根断裂后不同时间的移植修复对神经元影响的研究  70-80
  材料与方法  70-71
  结果  71-74
  讨论  74-75
  结论  75-76
  参考文献  76-78
  附图  78-80
全文小结与展望  80-81
文献综述  81-86
  参考文献  84-86
博士在读期间发表论文及获奖情况  86-87
致谢  87-89

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中图分类: > 医药、卫生 > 儿科学 > 小儿外科学 > 小儿各生理系统外科学
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