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海洋微生物代谢产物抗肿瘤活性成分研究

作　者: 韩小贤
导　师: 崔承彬；顾谦群
学　校: 中国海洋大学
专　业: 水产品加工与贮藏
关键词: 海洋微生物代谢产物分级组合筛选抗肿瘤活性追踪分离
分类号: R73-3
类　型: 博士论文
年　份: 2005年
下　载: 795次
引　用: 3次
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内容摘要

海洋微生物生存环境特殊,其次级代谢产物化学结构新颖、种类繁多,是新活性先导化合物的重要来源。为了寻找抗肿瘤活性先导化合物,本论文采用活性追踪的方法开展了海洋微生物抗肿瘤活性代谢产物的研究工作。内容包括:海洋微生物抗肿瘤活性菌株的分级组合筛选;活性菌株复筛和发酵条件考察;抗肿瘤活性成分的追踪分离;化合物单体的结构解析;单体化合物抗肿瘤活性的初步评价。采用海虾生物致死法和tsFT210细胞的流式细胞术筛选模型,以细胞周期抑制和细胞凋亡诱导以及坏死性细胞毒为活性指标,对采自青岛近海由实验室分离保藏的164株海洋微生物,进行了抗肿瘤活性的分级组合筛选。经海虾生物致死法一级初筛,得到活性菌株60株(LC₅₀<500μg/mL),阳性率为36.6%。对初筛有效的60株菌利用流式细胞术筛选模型进行二级复筛,得到具有抗肿瘤活性的菌株27株,阳性率为复筛菌株数的45.0%、初筛菌株总数的16.5%。本论文选择3株代谢产物活性强、稳定性好的放线菌H1002和007株,以及真菌H1-04作为目标菌株,对其活性产物进行了研究。通过培养基选择试验,发酵时间试验,确定了3株目标菌的大量发酵条件。经大量发酵和萃取实验分别得到了3株目标菌的活性部位,反复运用薄层层析,正相、反相硅胶柱层析,LH-20凝胶柱层析,反相高压液相等化学的分离纯化手段,采用小鼠乳腺癌tsFT210细胞的镜检结合流式细胞术的活性追踪模型,通过活性成分的跟踪分离,从H1002的代谢产物中分离得到12个化合物单体（1-12）;从007中得到了6个单体化合物（4、7、8、13-15）;从H1-04中分离得到12个单体化合物（16-27）。继而,通过解析波谱数据并结合理化常数阐明了26个化合物的化学结构（化合物结构及名称参见Table 1）,其中生物碱类化合物9个(吲哚咔唑类生物碱化合物2个,喹唑啉生物碱类化合物6个,其他生物碱类化合物1

全文目录

摘要  5-11
Abstract  11-14
缩略词表  14-15
第一章前言  15-33
  第一节海洋放线菌产生的抗肿瘤活性物质  15-22
  第二节海洋真菌产生的抗肿瘤活性物质  22-31
  第三节本论文的研究思路、方法及技术路线  31-33
第二章海洋微生物抗肿瘤活性菌株的分级组合筛选  33-42
  第一节活性筛选模型  33-34
  第二节活性菌株的筛选  34-38
  第三节讨论与小结  38-40
  第四节实验部分  40-42
第三章活性菌株复筛及发酵条件的考查  42-53
  第一节活性菌株发酵物的稳定性试验  42-43
  第二节活性菌株培养基选择试验  43-46
  第三节活性菌株发酵时间的考查  46-49
  第四节活性菌株活性物质萃取试验  49-51
  第五节小结与讨论  51-53
第四章海洋微生物抗肿瘤活性成分的提取分离  53-72
  第一节海洋放线菌H1002抗肿瘤活性成分的提取分离  53-58
  第二节马杜拉放线菌Actinomadura sp.nov.007抗肿瘤活性成分的提取分离  58-64
  第三节烟曲霉Aspergillus fumigatus Fres. H1-04抗肿瘤活性成分的提取分离  64-69
  第四节实验部分  69-70
  第五节小结与讨论  70-72
第五章化合物单体的结构解析  72-114
  第一节生物碱类化合物的结构解析  72-89
  第二节二氧哌嗪类化合物的结构解析  89-103
  第三节其他化合物的结构解析  103-107
  第四节实验部分  107-112
  第五节小结与讨论  112-114
第六章单体化合物抗肿瘤活性的初步评价  114-128
  第一节抗肿瘤活性测试方法  114-115
  第二节生物碱类化合物的抗肿瘤活性测试结果  115-122
  第三节二氧哌嗪类化合物的测试结果  122-124
  第四节其他类化合物的测试结果  124-126
  第五节小结与讨论  126-128
结语  128-130
创新点与研究特色  130-131
参考文献  131-141
本文相关学术成果  141-142
致谢  142-143
附图  143-152
中国海洋大学攻读博士学位论文答辩聘书  152

海洋微生物代谢产物抗肿瘤活性成分研究

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