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阻断白血病细胞泛素通路的蛋白质组分析及其eIF-5A的功能研究

作　者: 靳宝锋
导　师: 沈倍奋；张学敏
学　校: 中国人民解放军军事医学科学院
专　业: 分子免疫学
关键词: 泛素-蛋白酶体通路蛋白质组学蛋白质质谱鉴定细胞凋亡 eIF-5A
分类号: R733.7
类　型: 博士论文
年　份: 2003年
下　载: 153次
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内容摘要

泛素-蛋白酶体通路(ubiquitin-proteasome pathway，简称UP通路)是真核细胞内降解调节因子等短寿蛋白的重要途径，它参与了细胞内许多重要的生理生化过程(如DNA损伤修复、细胞周期的运转、信号传递、抗原提呈、蛋白的跨膜定位等)。近年来，UP通路在细胞凋亡中的作用越来越受到重视，与之相关的调控机制也被广泛研究。应用特异性蛋白酶体抑制剂阻断UP通路，可诱导多种人肿瘤细胞的凋亡，为人类开发新的抗肿瘤药物提供了新的思路。然而阻断UP通路诱导肿瘤细胞凋亡的机制以及对不同细胞产生不同生物学效应的原因，目前并不清楚；阻断UP通路后的敏感蛋白之一——真核翻译起始因子5A(eIF-5A)参与细胞增殖和凋亡调控的机制也有待阐明。本工作首先用UP通路抑制剂MG-132诱导白血病细胞Mo7e凋亡，同时Caspase-3被激活，接着通过蛋白质组学方法建立了在此凋亡过程中蛋白质组的时间动态变化图谱。用另一UP通路特异性抑制剂(Lactacystin)和其他白血病细胞系得到同样结果。用生物质谱方法及数据库检索实现了对敏感蛋白点的鉴定，共39个，它们广泛参与细胞内的众多生理事件，其中profilin 1和Rho GDI2的表达变化与Caspase-3的激活相关，eIF-5A的hypusine修饰在阻断UP通路后被抑制，使非hypusine修饰状态的eIF-5A富集。外源性hypusine修饰抑制剂(DAH)可抑制Mo7e细胞的生长，使其细胞周期停滞于G1／S期，且有一定的促凋亡效应，此效应与MG-132相比要弱的多。eIF-5A在细胞周期时相中的G1期表达较高，进入S期表达量急剧降低且一直持续到G2／M期，当再次进入G1期时表达量又明显增加，提示eIF-5A可能参与细胞周期G1／S转换相关蛋白的表达调控。反义寡核苷酸抑制eIF-5A的表达，可增强GM-CSF对Mo7e细胞促增殖活性，而eIF-5A的过表达可增加COS7细胞对MG-132的敏感性，但其hypusine位点突变体则无此效应，说明eIF-5A的hypusine状态在MG-132诱导的凋亡过程中扮演中扮演重要角色，博士论文中文摘要不过hypusine修饰并不影响e工F一5A的二聚化和泛素化状态，其详细的生理意义仍需进一步探讨。另外在本工作中，我们也构建了含N端Myc标签的eIF一5A及其hypusine位点突变体细胞株，为分析eIF一5A的相互作用蛋白及eIF一5A与核酸的相互作用奠定了基础。以上结果表明，eIF一SA在细胞凋亡和增殖调控中起着重要作用，而其hyPusine修饰是其功能发挥不可缺少的成分，但要阐明e1F一5A参与细胞周期和凋亡调控的详细机制，仍需要进一步深入分析。

全文目录

目录  3-4
英文缩略词  4-6
中文摘要  6-8
英文摘要  8-10
前言  10-15
第一部分阻断白血病细胞泛素通路的蛋白质组学分析  15-35
  材料与方法  15-20
  结果与讨论  20-34
  小结  34-35
第二部分 eIF-5A的鉴定和部分功能分析  35-49
  材料与方法  35-37
  结果与讨论  37-48
  小结  48-49
第三部分 eIF-5A的表达和细胞活性分析  49-63
  材料与方法  49-53
  结果与讨论  53-62
  小结  62-63
第四部分 eIF-5A的二聚化和泛素化状态分析  63-72
  材料与方法  63-66
  结果与讨论  66-71
  小结  71-72
总结  72-73
参考文献  73-78
致谢  78-79
发表文章  79-80
文献综述  80-88

阻断白血病细胞泛素通路的蛋白质组分析及其eIF-5A的功能研究

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