学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

Wnt/β-catenin信号通路调控猪骨骼肌纤维类型变化的初步研究

作　者: 杨秋梅
导　师: 杨公社
学　校: 西北农林科技大学
专　业: 动物学
关键词: 猪 Wnt/β-catenin信号通路肌纤维类型卫星细胞分化
分类号: S828.91
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
下　载: 46次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载

内容摘要

骨骼肌纤维类型及数量影响家畜肉品质。根据其代谢和收缩功能,猪生后骨骼肌纤维分为慢速氧化型、快速氧化型、快速酵解型和中间型四种,分别由不同的肌球蛋白重链(myosin heavy chain,MyHC)异构体MyHC-I、MyHC-II2a、MyHC-II2b和MyHC-II2x确定。猪骨骼肌纤维数目在出生前已确定,在生后的生长发育过程中,主要是骨骼肌卫星细胞的分化及肌纤维类型的转变。研究如何有效控制猪骨骼肌卫星细胞定向分化,调控肌纤维类型组成,改善肉品质具有重要的实践意义。Wnt/β-catenin信号通路在肌肉生长、发育过程中起着重要调节作用。目前,Wnt/β-catenin信号通路调控出生后猪骨骼肌纤维类型组成作用还未见报道。因此,本研究利用冰冻切片HE染色、油红O染色、mATPase及免疫组化等组织学方法及Real time PCR、Western Blotting分子生物学技术,在明确猪骨骼肌发育的组织形态学特征和组织学规律的基础上,研究Wnt/β-catenin信号通路相关基因在猪骨骼肌发育过程中的表达规律;再利用15 mMol/L LiCl处理单根肌纤维分离培养的骨骼肌卫星细胞,采用Western Blotting、免疫荧光等细胞生物学及分子生物学技术,探讨其在猪骨骼肌卫星细胞分化过程中的调控作用。主要研究结果如下:1.随着猪日龄增长,骨骼肌纤维横切面积逐渐增大,慢肌向快肌转化,慢肌纤维横切面积明显小于快肌纤维横切面积;比目鱼肌相对于背最长肌和趾长伸肌,其聚脂能力强,慢肌含量高。2.猪背最长肌发育过程MyHC-I、GSK-3β、β-catenin和Fz3 mRNA随着个体日龄增长表达量下降;MyHC-IIb mRNA表达逐渐升高;MyHC-IIa mRNA表达在1日龄~2周龄阶段升高后又降低;MyHC-IIx mRNA表达变化不显著。慢肌、β-catenin和p-GSK-3β蛋白与mRNA表达一致,而p-β-catenin、GSK-3β蛋白及快肌蛋白表达上调。β-catenin和慢肌蛋白表达量在6月龄猪比目鱼肌中表达最高,趾长伸肌中表达最低;快肌蛋白的表达量则相反;3. 15 mMol/L LiCl诱导骨骼肌卫星细胞向慢肌分化,p-GSK-3β、β-catenin、myosin及慢肌蛋白增加,p-β-catenin、GSK-3β及快肌蛋白减少,并且核内源性β-catenin增多。综上所述,随着年龄增长,骨骼肌纤维横切面积逐渐增大,且快肌纤维显著大于慢肌;比目鱼肌相对于背最长肌和趾长伸肌,其聚脂能力强,慢肌含量高。发现Wnt/β-catenin信号通路促进猪骨骼肌慢肌纤维生长。利用LiCl激活经典Wnt信号通路,在猪骨骼肌卫星细胞分化中发挥正调节作用,促进成肌分化;并诱导猪骨骼肌卫星细胞向慢肌分化。

全文目录

摘要  6-8
ABSTRACT  8-12
文献综述  12-27
  第一章骨骼肌生长发育及再生概述  12-18
    1.1 骨骼肌生长发育过程  12-15
      1.1.1 体节发育  12-13
      1.1.2 生肌节发育  13
      1.1.3 肌纤维形成  13-14
      1.1.4 骨骼肌纤维类型的分类  14-15
    1.2 骨骼肌再生  15-18
      1.2.1 肌卫星细胞的起源及特征  15-16
      1.2.2. 调控卫星细胞分化的转录因子  16-18
  第二章 Wnt 信号与骨骼肌发育  18-27
    2.1 Wnt 及信号通路  18-23
      2.1.1 Wnt 家族  18-19
      2.1.2 多条Wnt 信号途径  19-23
    2.2 Wnt/β-catenin 信号通路在骨骼肌发育过程中的作用  23-25
    2.3 Wnt/β-catenin 在骨骼肌纤维类型生长过程中的作用  25-27
试验研究  27-60
  前言  27-28
  第三章猪骨骼肌发育过程中的组织形态学研究  28-34
    3.1 实验材料与方法  28
      3.1.1 实验动物  28
      3.1.2 主要试剂及配方  28
      3.1.3 实验仪器与器械  28
      3.1.4 实验材料及冰冻切片制备  28
      3.1.5 主要的实验方法  28
    3.2 结果与分析  28-32
      3.2.1 冰冻切片HE 染色  28-30
      3.2.2 冰冻切片油红O 染色  30-31
      3.2.3 冰冻切片免疫组化染色  31-32
      3.2.4 冰冻切片m ATPase 染色  32
    3.3 讨论  32-33
    3.4 小结  33-34
  第四章猪骨骼肌发育过程中 Wnt  34-45
    4.1 材料与方法  34-35
      4.1.1 实验动物  34
      4.1.2 主要试剂及配方  34
      4.1.3 主要实验仪器及设备  34
      4.1.4 主要实验方法  34-35
      4.1.5 统计分析  35
    4.2 结果  35-42
      4.2.1 猪背最长肌发育过程中Wnt/β-catenin 信号通路相关基因与 MyHCs 的表达规律  35-41
      4.2.2 猪不同部位骨骼肌中β-catenin 与MyHCs 的表达规律  41-42
    4.3 讨论  42-44
    4.4 小结  44-45
  第五章 Wnt/β-catenin 信号通路对猪骨骼肌卫星细胞分化为快、慢肌的影响  45-60
    5.1 材料与方法  45-46
      5.1.1 实验动物  45
      5.1.2 主要试剂及配方  45
      5.1.3 主要仪器设备  45
      5.1.4 主要的实验方法  45-46
      5.1.5 统计分析  46
    5.2 结果与分析  46-57
      5.2.1 猪骨骼肌卫星细胞的鉴定  46-47
      5.2.2 LiCl 处理猪骨骼肌卫星细胞最佳浓度筛选  47-48
      5.2.3 LiCl 处理后Wnt/β-catenin 信号通路相关因子的蛋白表达  48-50
      5.2.4 激活Wnt/β-catenin 信号通路促进猪骨骼肌卫星细胞分化  50-54
      5.2.5 LiCl 处理后促进猪骨骼肌卫星细胞向慢肌分化  54-57
    5.3 讨论  57-59
    5.4 小结  59-60
结论  60
创新点  60
有待进一步完善及深入研究的问题  60-61
参考文献  61-71
附录  71-79
缩略词表  79-80
致谢  80-81
作者简介  81

Wnt/β-catenin信号通路调控猪骨骼肌纤维类型变化的初步研究

内容摘要

全文目录

相似论文