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金刚藤抗肿瘤活性的药理药效学研究

作　者: 徐文
导　师: 刘建文
学　校: 华东理工大学
专　业: 微生物与生化药学
关键词: 金刚藤山柰酚7-O-β-D-葡萄糖苷 HeLa人宫颈癌细胞 G2期阻滞凋亡
分类号: R285.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2008年
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内容摘要

抗肿瘤药物研究是当今生命科学中意义重大的研究领域,天然产物具有结构骨架多样性的特点,是发现抗肿瘤药物先导化合物的重要来源。金刚藤,又名菝葜,为较常用中药,初步研究表明,菝葜具有良好疗效抗肿瘤作用。本课题着眼于金刚藤中分离的抗肿瘤活性单体成分山柰酚7–O-β-D-葡萄糖苷(Kaempferol-7-O-β-D-glucoside (KG)),在整体动物水平、细胞水平和分子水平三方面探讨了其抑制肿瘤细胞增殖的机理,为寻求高效、低毒抗肿瘤新药的先导化合物提供了理论依据。通过MTT和克隆形成实验,KG具有广谱的抗肿瘤活性,对多种肿瘤细胞有生长抑制作用,且对正常细胞毒性较小。一方面,克隆形成和流式细胞分析的结果显示,KG通过阻遏细胞周期在G2期,抑制细胞分裂增殖。另一方面,通过Hoechst荧光染色、细胞形态分析和DNA片断化分析,确定细胞出现明显的凋亡特征。本研究继续分析了KG的抑制肿瘤细胞增殖的机理:KG以不依赖于p53的方式通过调节Cyclin B1, Cdk1的转录水平,减少Cyclin B1-Cdk1复合物的含量,将细胞阻滞在G2期;通过抑制NF-κB核转位,下调Bcl-2蛋白的表达并呈剂量依赖性,上调Bax的表达,使得Bcl-2/Bax的比值降低,诱导细胞凋亡。体内实验结果表明,KG对荷瘤小鼠体内肿瘤的生长具有明显的抑制作用。并且,在抑制肿瘤增值的同时显著提高了小鼠的存活率,小鼠体重平稳,高浓度组体重略有下降。上述实验结果表明,KG能低毒高效抑制肿瘤细胞的增殖,在体内体外都具有良好的抗肿瘤活性,是潜在的高效抗肿瘤先导化合物。

全文目录

摘要  2-3
Abstract  3-7
第1章绪论  7-22
  1.1 抗肿瘤药物市场分析  7-8
    1.1.1 世界及我国癌症发病现状  7
    1.1.2 开发抗肿瘤中草药  7-8
  1.2 金刚藤研究概况  8-9
    1.2.1 金刚藤概述  8
    1.2.2 金刚藤的化学成分研究  8-9
  1.3 金刚藤的药理作用研究概况  9-11
    1.3.1 抗感染作用  9
    1.3.2 抗炎镇痛作用  9-10
    1.3.3 抗肿瘤作用  10
    1.3.4 活血和增强免疫作用  10
    1.3.5 抑制血糖作用  10
    1.3.6 毒副作用  10
    1.3.7 其它  10-11
  1.4 癌细胞及其凋亡概述  11-16
    1.4.1 癌细胞的主要特性  11
    1.4.2 细胞凋亡的生物学特征  11-13
    1.4.3 细胞凋亡异常与肿瘤发生  13-14
    1.4.4 凋亡相关基因Bcl-2 家族概述  14-16
  1.5 细胞周期与肿瘤治疗  16-19
    1.5.1 细胞周期及其相关蛋白的研究现状  16-18
    1.5.2 细胞周期研究对肿瘤治疗的意义  18
    1.5.3 细胞周期阻滞药物的研究现状  18-19
  1.6 展望  19
  1.7 研究的目标、内容、创新点和意义  19-22
    1.7.1 研究目标  19
    1.7.2 研究内容  19-20
    1.7.3 创新点  20-21
    1.7.4 研究意义  21-22
第2章一般材料和方法  22-31
  2.1 常用的试验材料  22-24
    2.1.1 细胞株  22
    2.1.2 常用试剂  22-24
  2.2 仪器与设备  24-25
  2.3 常用试剂的配制  25-27
  2.4 常用方法  27-31
第3章 KG 抑制癌细胞增殖  31-40
  3.1 引言  31
  3.2 材料和方法  31-34
    3.2.1 细胞株  31
    3.2.2 主要试剂  31
    3.2.3 主要仪器  31
    3.2.4 实验方法  31-34
    3.2.5 数据处理  34
  3.3 结果  34-38
    3.3.1 KG 对各种细胞存活率的影响  34-36
    3.3.2 KG 对各种细胞生长的抑制作用  36-37
    3.3.3 KG 对宫颈癌细胞HeLa 抑制作用的浓度和时间性  37-38
  3.4 讨论  38-40
第4章 KG 的体内外抗肿瘤研究  40-50
  4.1 引言  40
  4.2 材料和方法  40-43
    4.2.1 主要试剂  40-41
    4.2.2 主要仪器设备  41
    4.2.3 实验方法  41-43
    4.2.4 统计方法  43
  4.3 结果  43-48
    4.3.1 流式细胞技术分析KG 对细胞周期的影响  43-46
    4.3.2 流式细胞仪测定KG对细胞凋亡率的影响  46
    4.3.3 KG对HeLa细胞形态的影响  46-47
    4.3.4 DNA片断化法测凋亡  47-48
  4.4 讨论  48-50
第5章 KG 抑制细胞增殖的分子机理  50-62
  5.1 引言  50
  5.2 材料和方法  50-58
    5.2.1 主要试剂  50-51
    5.2.2 主要仪器  51
    5.2.3 实验方法  51-58
  5.3 结果  58-60
    5.3.1 KG作用后周期蛋白cycli1181和Cdk1  58
    5.3.2 KG作用后周期蛋白p53和p21的变化  58
    5.3.3 KG作用后NF-κB核转位的变化，以及Bax, Bcl-2 表达的变化  58-60
  5.4 讨论  60-62
第6章 KG 体内抗肿瘤活性研究  62-66
  6.1 引言  62
  6.2 材料和方法  62-63
    6.2.1 动物  62
    6.2.2 主要试剂  62
    6.2.3 主要仪器设备  62
    6.2.4 实验方法  62-63
  6.3 结果  63-64
    6.3.1 KG 在体内抑制肿瘤增殖的作用  63-64
    6.3.2 KG 对荷瘤小鼠体重的影响  64
  6.4 讨论  64-66
第7章结论  66-68
参考文献  68-73
致谢  73-74
论文发表情况  74

金刚藤抗肿瘤活性的药理药效学研究

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