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氯胺酮慢性中毒诱导小鼠心肌/脑组织细胞凋亡的表达

作　者: 杨菊
导　师: 卞士中
学　校: 苏州大学
专　业: 法医学
关键词: 氯胺酮药物滥用心肌细胞脑神经细胞凋亡 Caspase-3 TUNEL
分类号: D919
类　型: 硕士论文
年　份: 2007年
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内容摘要

目的:观察氯胺酮慢性中毒诱导小鼠心肌/脑组织细胞凋亡的表达。方法:采用小鼠尾静脉给药,建立小鼠氯胺酮中毒模型。将90只昆明小鼠随机分为对照组和实验组,其中对照组10只,实验组80只,对照组及实验组内分设1,2,4,8,12周组,其中实验组小鼠各时间点分别给予4mg/kg、10mg/kg、20mg/kg、30mg/kg氯胺酮注射,对照组给予生理盐水注射。观察并记录氯胺酮中毒小鼠的行为学改变;用光镜观察氯胺酮慢性中毒小鼠组织病理学变化;用透射电镜观察氯胺酮中毒所致的心肌细胞及神经细胞超微结构凋亡相关变化,进行定性检测;用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)荧光染色观察DNA核小体间降解,计数发生凋亡细胞数,进行定量检测;为了推断凋亡发生的途径,用共聚焦显微镜检测活化的Caspase-3蛋白的表达。结果:(1)氯胺酮中毒后小鼠出现口角和面部抽动及点头,前肢阵挛等行为学变化,该变化与氯胺酮的剂量有关,随着氯胺酮剂量的增加,小鼠的行为学改变越明显。(2)HE染色光镜观察结果显示,对照组未见明显异常改变,实验组小鼠组织细胞结构正常,细胞核深染或无核改变。(3)透射电镜结果显示,各实验组小鼠于氯胺酮中毒1周均可见心肌细胞/脑组织细胞核浓缩,边聚,碎裂,说明氯胺酮可诱导心肌细胞及脑组织细胞凋亡。(4)TUNEL结果显示,氯胺酮中毒1周心肌组织阳性细胞计数明显增多,与对照组比较有显著性差异(P<0.05);此后随着时间的延长,凋亡细胞呈时间依赖性逐渐减少,其中4～20mg/kg实验组在第12周时,TUNEL阳性细胞计数仍高于对照组(P<0.05),30mg/kg实验组TUNEL阳性细胞计数在第8周时与对照组比较无明显差异(P>0.05)。在氯胺酮中毒不同时间,4～10mg/kg实验组心肌细胞凋亡呈剂量依赖性增多,在20～30mg/kg实验组量效关系不明显。TUNEL结果显示,氯胺酮中毒1周时脑组织阳性细胞计数明显增多,与对照组比较有显著性差异(P<0.05);之后随着时间的延长,凋亡细胞数量呈时间依赖性逐渐减少,其中4～20mg/kg实验组在第12周时,TUNEL阳性细胞计数与对照组比较仍有明显差异(P<0.05),30mg/kg实验组TUNEL阳性细胞计数在第8周时与对照组比较无明显差异(P>0.05)。在氯胺酮中毒不同时间,4～10mg/kg实验组脑组织细胞凋亡细胞数呈剂量依赖性增多,在20～30mg/kg实验组量效关系不明显。(5)共聚焦显微镜检测结果显示,氯胺酮中毒1周时小鼠心肌组织Caspase-3激活阳性细胞数量增加,与对照组比较有明显差异(P<0.05),高峰在氯胺酮中毒1周,随着时间的延长Caspase-3激活阳性细胞数呈时间依赖性减少,其中4～20mg/kg实验组在第12周时,Caspase-3激活阳性细胞数仍高于对照组(P<0.05),30mg/kg实验组在第8周时与对照组比较无明显差异(P>0.05)。在氯胺酮中毒不同时间,4～10mg/kg实验组心肌组织Caspase-3激活阳性细胞数呈剂量依赖性增多,在20～30mg/kg组量效关系不明显。共聚焦检测结果显示,氯胺酮中毒1周时小鼠脑组织Caspase-3激活阳性细胞数量显著增加,并达高峰,与对照组比较有明显差异(P<0.05),随着时间的延长Caspase-3激活阳性细胞数呈时间依赖性减少,其中4～20mg/kg实验组在第12周时,Caspase-3激活阳性细胞数仍高于对照组(P<0.05),30mg/kg实验组在第8周时与对照组比较无明显统计学差异(P>0.05)。4～10mg/kg实验组脑组织Caspase-3激活阳性细胞数呈剂量依赖性增多,在20～30mg/kg组量效关系不明显。提示Caspase-3激活阳性细胞数变化与心肌及脑组织细胞凋亡数量变化趋势一致。结论:氯胺酮慢性中毒可诱导心肌组织细胞及脑组织细胞发生凋亡,机制与Caspase-3激活有关。

全文目录

中文摘要  3-5
Abstract  5-8
研究背景  8-37
  第一部分：小鼠氯胺酮中毒后的行为改变及形态学观察  13-20
    材料与方法  13-15
    实验结果  15-19
    小结  19-20
  第二部分：氯胺酮慢性中毒诱导小鼠心肌／脑组织细胞凋亡的变化  20-28
    材料与方法  20-23
    结果  23-27
    小结  27-28
  第三部分：氯胺酮对小鼠心肌/脑组织细胞CASPASE-3激活的影响  28-37
    材料与方法  28-31
    结果  31-36
    小结  36-37
讨论  37-41
结论  41-42
参考文献  42-46
硕士期间发表的文章  46-47
附录一：综述  47-56
附录二：科技论文  56-65
附录三：缩略词  65-66
致谢  66-67

氯胺酮慢性中毒诱导小鼠心肌/脑组织细胞凋亡的表达

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