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他克莫司通过CaN/NO/RUNX2通路抑制人骨髓间质干细胞增殖及向成骨细胞分化

作　者: 韦鸿雁
导　师: 肖洲生
学　校: 中南大学
专　业: 临床药理学
关键词: 他克莫司人骨髓间质干细胞 CaN NO RUNX2/Cbfa1
分类号: R96
类　型: 硕士论文
年　份: 2007年
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内容摘要

目的：探讨免疫抑制剂他克莫司（Tacrolimus，FK506）对原代人骨髓间质干细胞（Human Bone Marrow-derived Mesenchymal StemCells，HBMSCs）的增殖及向成骨细胞分化的影响及其作用机制。研究方法：建立原代HBMSCs体外模型，在无酚红α-MEM培养基（含10％经葡聚糖包被炭末吸附的血清）中加入β-甘油磷酸（β-glycerophosphate,β-GP）、抗坏血酸（Antiscorbic acid）和地塞米松（Methylprednisolone），诱导HBMSCs向成骨细胞分化。观察不同浓度的FK506对HBMSCs的增殖及向成骨细胞分化的影响；并分别合用雌二醇（Estradiol,E2）或白藜芦醇（Resveratrol，RSVL），探讨FK506作用于HBMSCs的分子机制。测定5-溴脱氧尿核苷（Bromodeoxyuridine，BrdU）掺入率，反映细胞DNA合成即增殖情况；测定细胞内碱性磷酸酶活性（Alkaline phosphatase，ALP）与钙沉积量，反映HBMSCs向成骨细胞分化的情况；用Western Blot蛋白印迹法反映RUNX2／Cbfa1表达的情况。用一氧化氮（Nitric oxide，NO）试剂盒及钙调神经磷酸酶（Calcineurin，CaN）试剂盒测定NO产量及CaN活性的变化。结果：他克莫司(0.01～2.5μmol.L^-1)呈剂量依赖性地抑制HBMSCs的一氧化氮的产量，并表现为5-溴脱氧尿核苷掺入率显著降低，细胞碱性磷酸酶活性及钙沉积量明显减少。1μmol.L^-1的他克莫司除以上作用外，还表现为显著抑制HBMSCs的CaN活性，细胞内成骨细胞特异性转录因子RUNX2／Cbfa1表达明显降低。且他克莫司(1μmol.L^-1)对HBMSCs向成骨细胞的分化的抑制作用不能被NO促进剂雌二醇(0.01μmol.L^-1)及及白藜芦醇(1μmol.L^-1)所逆转。结论：他克莫司呈剂量依赖性地抑制HBMSCs的增殖及其向成骨细胞的分化，其作用机制可能与其抑制HBMSC细胞内的CaN／NO／RUNX2／Cbfa1信号转导通路有关．

全文目录

中文摘要  4-5
英文摘要  5-8
第一章前言  8-10
第二章材料与方法  10-15
  2.1 试剂  10
  2.2 仪器  10
  2.3 细胞培养  10-11
  2.4 实验设计与分组  11
  2.5 观察指标  11-14
    2.5.1 细胞增殖指标  11-12
    2.5.2 HBMSCs向成骨细胞分化的指标  12
    2.5.3 CaN和 NO指标的测定  12-13
    2.5.4 Western Blot蛋白印迹法研究 RUNX2的表达  13-14
  2.6 结果统计  14-15
第三章结果  15-26
  3.1 HBMSCs的生长及形态  15
  3.2 FK506抑制原代 HBMSCs增殖及向成骨细胞分化  15
  3.3 FK506抑制 E2/RSVL对 HBMSCs的诱导效应  15-16
  3.4 FK506抑制 HBMSCs内的 CaN活性和 NO产量  16
  3.5 FK506对 RUNX2在 E2/RSVL诱导 HBMSCs的负性调节作用  16
  3.6 图表及图例  16-26
第四章分析与讨论  26-29
第五章结论  29-30
参考文献  30-35
综述  35-42
参考文献  42-47
致谢  47

他克莫司通过CaN/NO/RUNX2通路抑制人骨髓间质干细胞增殖及向成骨细胞分化

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