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汉防己甲素对体外增殖性瘢痕成纤维细胞的生物学影响

作　者: 曹治东
导　师: 石崇荣
学　校: 重庆医科大学
专　业: 外科学
关键词: 粉防己碱增殖性瘢痕细胞增殖细胞周期胶原蛋白胶原酶细胞凋亡
分类号: R622
类　型: 硕士论文
年　份: 2003年
下　载: 62次
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内容摘要

目的观察汉防己甲素对瘢痕成纤维细胞的生物学影响，并探讨其作用机理，为其临床应用提供理论依据。方法采用瘢痕成纤维细胞原代培养，将一系列梯度浓度的汉防己甲素（曲氨缩松钠作为阳性对照）与其共培养一段时间后，采用MTT记数法筛选Dm值，再按其Dm设计实验组。采用MTT法、PI染色流式细胞仪分析法、改良氯胺T法、SDS-PAGE电泳法、DNA琼脂糖凝胶电泳等方法研究汉防己甲素对成纤维细胞增殖活力、细胞周期进程、细胞外胶原蛋白含量、胶原酶活性以及TET诱导成纤维细胞凋亡的效应及机制。结果⑴ TET在2mg/L~8mg/L之间呈剂量及时间依赖性地抑制瘢痕成纤维细胞的增殖，使生长曲线不同程度的压低、分裂指数降低、G0-G1期细胞数减少、G2-M期增多、S期与G2-M期延长，光镜下见细胞突起变短，细胞由梭形变成椭圆形，核固缩、碎裂。P.C的改变近似于T2组(4mg/L TET)。⑵ 实验组细胞外胶原蛋白较对照组明显减少，随着药物浓度的增加和作用时间的延长，减少越显著。P.C的改变小于T2组。<WP=7>⑶ 在不抑制成纤维细胞增殖的情况下(<2mg/L/48小时)，即可显著提高胶原酶降解胶原蛋白的活性，也具有量效关系。P.C的改变远小于T2’(1mg/L TET)。⑷ 随着药物浓度的增加，实验组出现明显的凋亡峰，凋亡率逐渐上升，最高达13.49%，激素组的凋亡率略低于T2组。T.G和P.C DNA经琼脂糖凝胶电泳后呈现典型的梯度表现。结论 1 映证了TET具有剂量和时间依赖性地抑制成纤维细胞的增殖、胶原蛋白合成的作用。2 提高胶原酶活性、诱导成纤维细胞凋亡是TET抑制瘢痕增生的机制之一。3 汉防己甲素较激素的优越性为：①　汉防己甲素对瘢痕成纤维细胞的作用远远强于曲安缩松钠，故其有效剂量较低。②　汉防己甲素对瘢痕成纤维细胞的大部分生物学影响均有明显的剂量及作用时间依赖性，便于临床控制。③　因TET用量较小，可避免激素类的毒副作用。④　汉防己甲素系中药有效成分，其来源广泛，提取容易，成本低廉，易于推广。

全文目录

符号说明  3-6
中文摘要  6-8
英文摘要  8-11
正文汉防己甲素对体外增殖性瘢痕成纤维细胞的生物学影响  11-62
  前言  11-12
  材料与方法  12-22
    主要试剂  12-13
    主要仪器  13-14
    实验方法  14-22
  结果  22-31
  讨论  31-7
  结论  7-39
  照片  39-57
  参考文献  57-62
文献综述  62-74
  粉防己碱抗纤维化机制进展及其防治瘢痕的展望  62-69
  参考文献  69-74
致谢  74-75
攻读学位期间发表的论文  75-76

汉防己甲素对体外增殖性瘢痕成纤维细胞的生物学影响

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