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姜黄素血浆样品的高通量液相色谱定量分析及其药代动力学研究

作　者: 李霁
导　师: 范国荣；徐贵丽
学　校: 第二军医大学
专　业: 药物分析学
关键词: 液相色谱紫外检测荧光检测液相色谱-串联质谱检测 96孔板蛋白沉淀液液萃取血浆药代动力学姜黄素大黄素白藜芦醇高通量
分类号: R285
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

药物代谢动力学是定量描述药物进入体内以后的吸收、分布、代谢、排泄过程,通过测定生物样本中的药物或者代谢产物的浓度,可以更好的阐明药物的药效或者毒性,为新药研究的代谢筛选和临床用药的安全有效提供重要依据。随着组合化学技术和天然药物分离制备技术的发展,大量的候选药物需要进行药代动力学评价,这就要求建立并优化相关分析方法对生物样品中的目标成分(药物、代谢产物、其他外源性成分)进行高灵敏度、快速准确、低消耗的定量分析。本文构建了“准确、灵敏、低耗、高通量”的分析策略,建立了基于常规液相柱的快速有效分离分析方法,将其应用到姜黄素的药代动力学研究中。全文由四章组成:第一章概述,主要论述了生物样品的快速高通量分析方法在药代动力学中的重要性和应用进展,姜黄素的研究现状以及其体内外含量测定所用的常规检测方法,在此基础上本文阐述了实验立题依据和研究内容。第二章LC/MS/MS方法,为了研究软胶囊中姜黄素在SD大鼠体内的药代动力学特点,选择姜黄素提取物软胶囊内容物口服给药,姜黄素提取物注射液静脉注射给药两种方式,考察软胶囊中姜黄素在SD大鼠体内的药代动力学参数,计算口服给药软胶囊内容物的绝对生物利用度。采用LC/MS/MS方法,血浆预处理采用甲醇沉淀蛋白(4:1,V/V)。色谱分离条件为:Ultimate XB C-18 5μ50×4.6mm ID,柱温25℃;流动相:甲醇:水(80:20),其中含有甲酸0.01%,采用等梯度洗脱方式,流速0.30ml/min,进样量20μL,分析时间6 min。质谱检测条件为:采用ESI离子源、负离子检测,选择SRM工作方式进行一/二级质谱分析;其中姜黄素Q1(Mass)367、Q3(Mass)149,Collision energy 21.5eV;内标白藜芦醇Q1(Mass)227、Q3(Mass)143,Collision energy 16eV;Collision gas 1.8 mTorr;检测器电压1500V。第三章LC-UV方法,以姜黄素为研究对象,通过对液相柱的选择和优化,建立了常规高效液相色谱-紫外检测分析方法,用于姜黄素脂质体的质量控制和绝对生物利用度研究。分别对内标,流动相组成,流动相pH值,提取溶剂,液相色谱柱等影响因素做了系统的研究。最终使用Dikma色谱分析柱(5μm,100×4.6mm),流动相为乙腈:5%乙酸(75:25,v/v),流速为1mL/min,柱温为25℃,进样量为50μL,紫外检测波长为420nm,内标为大黄素,用96孔板蛋白沉淀进行血浆样品前处理,每个样品的分析周期为3min,最定量限为1ng/mL,常规条件下即可实现生物样品的高通量分析。第四章HPLC-FLD方法,基于上述方法的特点与不足,在样品前处理方法改进的基础上,建立了HPLC-FLD法用于姜黄素生物样品的快速分离分析。通过对实验条件的优化,最终选择Dikma色谱分析柱(5μm,100×4.6mm)进行分析,流动相为乙腈:3%乙酸(80:20,v/v),流速为1mL/min,柱温为25℃,进样量为50μL,λex为423nm,λem为536nm,内标为大黄素。在前一章中为提高分析速度,前处理方法采用96孔板蛋白沉淀,虽然处理过程较简单,但容易造成柱子堵塞,消耗较大,故对前处理进行了方法学改进和优化,最后选择96孔板液液萃取对生无样品进行纯化,减少柱子消耗。本实验更加体现了快速、简单、易行、低耗的实验设计策略,使得实验在常规条件下即可实现有效的生物样品高通量分析,并用于姜黄素药代动力学研究。

全文目录

摘要  8-10
Abstracts  10-12
英文缩写  12-13
第一章概述  13-24
  一、姜黄素研究现状及常规测定方法  13-15
    （一）姜黄素研究现状  13-14
    （二）姜黄素的常规测定方法  14-15
  二、生物样品高通量分析在药代动力学中的重要性及其应用  15-17
  三、选题依据与研究内容  17-18
  四、参考文献  18-24
第二章姜黄素血浆样品的液相色谱-串联质谱高通量分析及降脂通络软胶囊在SD大鼠体内的药代动力学研究  24-48
  一、引言  24-25
  二、仪器和试药  25
    （一）实验仪器  25
    （二）药品和试剂  25
  三、姜黄素血浆样品的液相色谱-质谱串联高通量分析方法学研究  25-35
    （一）试验样品溶液的配制  25-26
    （二）血浆样品预处理  26-27
    （三）色谱分离条件  27
    （四）质谱检测条件  27
    （五）血浆样品高通量分析方法学评价  27-35
  四、姜黄素软胶囊在SD大鼠体内的药代动力学研究  35-45
    （一）实验设计  35-36
    （二）数据分析  36-37
    （三）实验结果  37-45
  五、讨论  45
    （一） LC-MS/MS条件优化  45
    （二）样品前处理条件  45
    （三）分析方法评价指标  45
  六、本章小结  45-46
  七、参考文献  46-48
第三章姜黄素血浆样品的液相色谱-紫外光谱高通量分析及姜黄素脂质体在SD大鼠体内的药代动力学研究  48-72
  一、引言  48-49
  二、仪器和试药  49-50
    （一）实验仪器  49
    （二）药品和试剂  49-50
  三、姜黄素血浆样品的液相色谱-紫外光谱高通量分析方法学研究  50-60
    （一）试验样品溶液的配制  50-51
    （二） SD大鼠血浆样品预处理  51
    （三）液相色谱-紫外光谱分离条件  51
    （四）血浆样品高通量分析方法学评价  51-60
  四、姜黄素脂质体在SD大鼠体内的药代动力学研究  60-67
    （一）实验设计  60-61
    （二）数据分析  61-62
    （三）实验结果  62-67
  五、讨论  67-69
    （一）色谱条件  67-68
    （二）样品前处理条件  68
    （三）分析方法评价指标  68-69
    （四）生物样品测定评价  69
  六、本章小结  69
  七、参考文献  69-72
第四章姜黄素血浆样品的高效液相色谱-荧光法高通量分析及姜黄素H001 制剂在SD 大鼠体内的药代动力学研究  72-93
  一、引言  72
  二、材料和仪器  72-73
    （一）实验仪器  72
    （二）药品和试剂  72-73
  三、姜黄素血浆样品的液相色谱-荧光光谱高通量分析方法学研究  73-82
    （一）试验样品溶液的配制  73-74
    （二） SD大鼠血浆样品预处理  74
    （三）色谱条件  74
    （四）血浆样品高通量分析方法学评价  74-82
  四、姜黄素受试制剂H001在SD大鼠体内的药代动力学研究  82-90
    （一）实验设计  82
    （二）数据分析  82-83
    （三）实验结果  83-90
  五、讨论  90
    （一）色谱条件  90
    （二）样品前处理条件  90
    （三）分析方法评价指标  90
  六、本章小结  90-91
  七、参考文献  91-93
总结  93-96
综述  96-110
在读期间发表论文和参加科研工作的情况说明  110-111
致谢  111

姜黄素血浆样品的高通量液相色谱定量分析及其药代动力学研究

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