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基于雌激素受体的抗骨质疏松药物细胞筛选模型的建立及应用

作　者: 杜渐
导　师: 秦路平；张宏
学　校: 第二军医大学
专　业: 生药学
关键词: 雌激素受体雌激素反应元件高通量筛选植物雌激素选择性雌激素受体调节剂骨质疏松症
分类号: R580
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

目的:根据雌激素样化合物通过雌激素受体介导调控靶基因转录表达的作用机制和原理,拟建立基于报告基因的雌激素细胞检测系统,作为快速筛检植物雌激素的筛选方法而获得抗骨质疏松症的新药物。方法:选择人成骨肉瘤癌细胞(MG63)作为受试细胞,以Luciferase荧光素酶作为报告基因,构建雌激素反应元件调控的报告基因质粒pERE-Luc,瞬时转入MG63细胞,稳定转染后,用雌二醇作为阳性物,检测报告基因的表达水平作为判断受试物是否具有雌激素样活性的方法。结果:在构建的体外雌激素细胞检测系统中,MG63细胞本身有雌激素受体,稳定转染雌激素反应元件调控的报告质粒pERE-Luc后,通过受体介导的化合物可引起报告基因的表达;而未转染pERE-Luc的情况下不能引起报告基因的表达。在植物提取物中筛选到大量的植物雌激素可能具有抗骨质疏松作用。结论:通过以上筛选发现这种体外活性筛选的模型具有方便、快速、稳定、有效、微量、简单等优点,该方法有助于从植物中更快的开发到有效化合物。

全文目录

摘要  5-6
Abstract  6-7
英文缩略词表  7-8
前言  8-10
第一章文献综述  10-17
  1 抗骨质疏松症的研究进展  10-13
  2 抗骨质疏松新药开发研究进展简介  13-17
第二章基于雌激素受体的抗骨质疏松高通量筛选细胞模型的建立  17-29
  1 实验试剂及仪器  17-19
  2 pERE-Luc 质粒的建立  19-24
  3 细胞筛选模型的建立  24-26
  4 高通量筛选模型的优化  26-29
第三章高通量筛选模型对大量植物提取物和单体化合物的筛选  29-32
  1 实验试剂及仪器  29
  2 实验材料  29
  3 MTT 活性初筛  29-31
  4 高通量筛选模型活性筛选  31-32
第四章结果与分析  32-40
  1 pERE 质粒的构建  32-33
  2 优化结果  33-38
  3 药物筛选  38-40
第五章结论与讨论  40-43
参考文献  43-48
在读期间发表论文和科研情况  48-49
致谢  49-50
附录  50-66

基于雌激素受体的抗骨质疏松药物细胞筛选模型的建立及应用

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