学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

抗克伦特罗单克隆抗体的研制与鼠β_2肾上腺素能受体基因的克隆及表达

作　者: 谷峰
导　师: 薛飞群
学　校: 中国农业科学院
专　业: 临床兽医学
关键词: 克伦特罗偶联物鉴定单克隆抗体 β2肾上腺素能受体基因克隆
分类号: S859.79
类　型: 硕士论文
年　份: 2003年
下　载: 108次
引　用: 1次
阅　读: 论文下载

内容摘要

克伦特罗临床上作为呼吸促进药物，主要用于治疗人兽哮喘。在畜牧生产中将克伦特罗作为生长促进剂使用具有明显提高肉品瘦肉率、降低脂肪含量的作用。克伦特罗在被机体吸收、转化、代谢的过程中，虽然大部分被代谢或排泄，但仍有相当量残留在肝脏、肌肉、视网膜等组织中。此残留对人畜的健康造成巨大威胁和危害，并由此在国内外引发多起食物中毒事件。研究克伦特罗药物残留检测相关技术及开展有克伦特罗样作用的安全药物的研究显得十分有意义。本论文从研究药物残留检测相关技术与寻找安全药物两方面为导向，其研究内容包括克伦特罗偶联物的制备与鉴定、抗克伦特罗单克隆抗体的研制和鼠β₂肾上腺素能受体基因的克隆及表达。因为克伦特罗等药物为小分子，它们只具有反应原性而无免疫原性，所以此类药物与大分子的偶联成功是产生抗体的关键，同时有关半抗原偶联物的鉴定工作少见报道，此研究以期积累鉴定药物偶联物的经验，更好作好药物免疫分析工作。在本论文中，在制备好克伦特罗的偶联物后，利用红外光谱、紫外光谱、FPLC、SDS-PAGE及免疫鉴定，确定偶联成功。本文对偶联物鉴定的几种方法作一比较与评价。通过实验，得出FPLC是以上几种鉴定偶联物的最佳方法。抗克伦特罗单克隆抗体的研制采用常规单克隆抗体制备技术，其中包括动物免疫与血清效价的测定、骨髓瘤细胞的培养、饲养细胞的制备、免疫脾细胞的获得、细胞融合与阳性克隆的筛选、阳性克隆的单克隆化等步骤。在经过以上步骤以后，获得了分泌抗克伦特罗单克隆抗体的细胞并对初步获得的抗体进行了效价测定。单克隆抗体的研制成功将有助于克伦特罗检测试剂盒的研制。同时，有助于克伦特罗样品的前处理。安全药物有两种思路：建立药物筛选模型筛选生物体内易分解的活性分子，从受体的抗体着手制备抗受体的抗体以及抗克伦特罗单抗的抗独特型抗体。而所有研究的前提是获得β₂肾上腺素能受体基因和抗克伦特罗单克隆抗体，所以此研究的基础工作之一是完成β₂肾上腺素能受体基因的克隆与表达工作。鼠β₂肾上腺素能受体基因的克隆及表达实验内容包括：PCR扩增与产物回收、回收产物与载体连接、连接产物的转化、蓝白斑筛选、阳性克隆的鉴定与基因测序、序列的分析比较。通过鉴定与序列比较，确定该基因鼠β₂肾上腺素能受体基因被克隆。在完成鼠p／肾上腺素能受体基因的克隆后，将其进行原核表达。将表达的蛋白进行SDS－rxGE电泳以检测基因的表达情况。这些为寻找安全药物及受体药物分析奠定了基础。本实验的研究意义在于：为药物残留检测及食品安全提供技术支持；为寻找安全药物奠定基础。

全文目录

第一篇文献综述与引言  12-25
  1 药物残留及克伦特罗检测方法与相关技术研究进展  12-23
    1.1 药物残留的产生与监测  12-13
    1.2 克伦特罗检测方法研究进展  13-19
    1.3 药物残留检测用抗体发展历程  19-23
  2 论文研究内容与意义  23-25
第二篇克伦特罗偶联物的制备与鉴定  25-35
  1 实验材料与实验仪器  25
  2 实验方法  25-27
    2.1 偶联物的制备  25-26
    2.2 偶联物的鉴定  26-27
    2.3 偶联物分子比测定  27
  3 实验结果  27-31
    3.1 偶联物的制备实验结果  27
    3.2 偶联物的鉴定实验结果  27-31
    3.3 偶联物分子比测定结果  31
  4 讨论  31-33
    4.1 偶联机理  31
    4.2 偶联物鉴定  31-33
  5 实验小结  33-35
第三篇抗克伦特罗单克隆抗体的研制  35-49
  1 实验材料与实验仪器  35-36
  2 实验方法  36-40
    2.1 细胞融合前的准备  36-38
    2.2 细胞融合、选择杂交瘤细胞  38-39
    2.3 杂交瘤的克隆化和冻存  39-40
    2.4 细胞培养法产生单克隆抗体效价测定  40
  3 实验结果  40-42
    3.1 鼠血清效价的测定  40-41
    3.2 细胞融合过程及融合后观察  41-42
    3.3 阳性克隆的筛选  42
    3.4 阳性克隆的的单克隆化  42
    3.5 单克隆抗体效价测定  42
  4 讨论  42-46
    4.1 杂交瘤技术研究背景与运用  42-43
    4.2 单克隆抗体制备过程中影响因素  43-46
  5 实验小结及此研究后需要进行的工作  46-49
第四篇鼠β_2肾上腺素能受体基因的克隆及序列分析  49-64
  1 实验材料与实验仪器  49-50
  2 实验方法  50-53
    2.1 实验技术总路线  50
    2.2 实验步骤  50-53
  3 实验结果  53-59
    3.1 基因组DNA的电泳结果  53-54
    3.2 PCR扩增产物  54-55
    3.3 重组质粒的筛选与阳性克隆的鉴定  55
    3.4 重组质粒序列测定结果及序列分析  55-59
  4 讨论  59
  5 实验小结  59-64
第五篇鼠β_2肾上腺素能受体基因的原核表达  64-71
  1 实验材料与实验仪器  64-65
  2 实验方法  65-67
    2.1 实验技术总路线  65-66
    2.2 实验步骤  66-67
  3 实验结果  67-69
    3.1 阳性克隆的筛选结果  67
    3.2 重组质粒的筛选与阳性克隆的鉴定  67-68
    3.3 诱导时相表达与SDS-PAGE检测  68-69
  4 讨论  69-70
  5 实验小结  70-71
结论  71-72
参考文献  72-79
附: 硕士期间发表论文  79-80
致谢  80

抗克伦特罗单克隆抗体的研制与鼠β_2肾上腺素能受体基因的克隆及表达

内容摘要

全文目录

相似论文