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几种AD相关基因的siRNA质粒的构建及其鉴定

作　者: 周昕
导　师: 王建枝
学　校: 华中科技大学
专　业: 病理学与病理生理学
关键词: RNA干扰 I1PP2A P53 CREB HEK293
分类号: R346
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要


RNA干涉(RNAi)技术在实验室中是一种强大的实验工具,它是利用具有同源性的双链RNA(dsRNA)诱导特异性的目标基因沉默,迅速降低基因表达水平。siRNA在RNA沉默通道中起中心作用,是对特定信使RNA(mRNA)进行降解的指导要素。本研究通过Nucleotide BLAST在线设计含有小发夹机构的2条I1PP2A、P53和CREB对应模板DNA序列,经过褪火、磷酸化、连接处理后克隆至psuppress质粒,构建重组质粒psuppress-siI1PP2A、psuppress-siP53、psuppress-siCREB。通过酶切和测序鉴定重组产物的正确性。然后使用lipofectAMINE 2000转染试剂将上述构建好的质粒分别转染HEK293细胞。培养一定时间之后提取蛋白,利用western blot检测I1PP2A、P53和CREB蛋白水平的变化。结果:经酶切及测序鉴定,成功构建了psuppress-siI1、psuppress-siP53、psuppress-siCREB的表达质粒。它们分别可显著抑制I1PP2A、P53和CREB的蛋白表达,与未转染组和阴性组对照细胞相比分别降低了75.1%、90.5%、72.1%。结论:psuppress-siI1、psuppress-siP53、psuppress-siCREB重组质粒分别能够抑制HEK293细胞中其相应基因的蛋白表达。为进一步研究它们的蛋白功能和在AD发病机制研究提供了实验工具。

全文目录


中文摘要  5-6
英文摘要  6-7
前言  7-8
材料和方法  8-21
结果  21-28
讨论  28-32
参考文献  32-36
综述  36-49
  参考文献  45-49
致谢  49

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中图分类: > 医药、卫生 > 基础医学 > 人体生物化学、分子生物学
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