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丙泊酚对发育中大脑皮层神经元细胞活性及凋亡的影响

作　者: 杨坤
导　师: 金先庆
学　校: 重庆医科大学
专　业: 儿科学
关键词: 丙泊酚皮层神经元细胞活性凋亡 TUNEL cleaved-caspase3
分类号: R965
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

目的：以体外培养的大脑皮层神经元为研究对象,选用不同浓度丙泊酚和不同的作用时间对其进行药物干预,研究其对发育中大脑皮层神经元细胞活性及凋亡的影响。方法：取24h内SPF级新生SD大鼠的大脑皮层神经元,培养6d经神经元鉴定后进行以下三个实验。实验一：96孔板中,设置6个组,每组设置3个平行副孔,C1组不加任何处理,为对照组,P1，2，3，4，5组加入丙泊酚,终浓度分别为2、5、10、20、50μg/ml,分别于给药后12、24、48h后用MTT法测每组的OD值。实验二：将在24孔板中培养6d的神经元C：组不做任何处理,Pⅰ、ⅱ、ⅲ组分别加入丙泊酚,终浓度为10、20、50μg/ml,孵育24h后用TUNEL染色法测神经元凋亡率。实验三：在培养体系中加入丙泊酚,每组5孔,C3组不做任何处理,为对照组,PⅠ、Ⅱ、Ⅲ组终浓度分别为10、20、50μg/ml,作用24h后,提取全蛋白,Westen-blot测cleaved-caspase3蛋白的表达。结果：(1)在倒置显微镜下观察,原代培养6d的大鼠大脑皮层神经元胞体饱满,密度适中,立体感强,突起较长,已互相连接成网络。(2)MTT检测结果显示,丙泊酚作用12h后,细胞活性无明显变化,作用24h后,MTT检测结果与对照组比,药物浓度为10、20μg/ml组与对照组比较有统计学意义(P<0.05),浓度为50μg/ml组有显著统计学意义(P<0.01)。作用48h后与正常对照比较,药物浓度为10、20、50μg/ml组均有统计学意义(p<0.01)(3)TUNEL法检测细胞凋亡率显示与C2组比较,Pⅰ、ⅱ、ⅲ组神经元凋亡率均升高,与对照组比较均有统计学意义(P<0.05),呈浓度依赖性。(4) Westen-blot检测到较高浓度组丙泊酚作用神经元24h后,cleaved-caspase3蛋白在大脑皮层神经元中的表达随浓度升高而逐渐增高,与C3组比较差异有统计学意义。(P<0.05)结论：丙泊酚可抑制神经元的存活、促进其凋亡,且抑制细胞存活和促进凋亡的程度与作用时间和浓度有关,这一结论为临床谨慎用药提供了理论依据。

全文目录

符号说明  5-6
中文摘要  6-8
英文摘要  8-10
前言  10-11
1 材料与方法  11-21
  1.1 研究对象和材料  11-14
  1.2 实验方法  14-21
2 结果  21-23
  2.1 原代培养的大脑皮层神经元形态学观察  21
  2.2 鉴定及纯度测定  21
  2.3 MTT法检测不同浓度丙泊酚对神经元的影响  21-22
  2.4 TUNEL染色测神经元凋亡  22
  2.5 Western blot方法检测丙泊酚处理对皮层神经元中蛋白Cleaved-caspase3表达的影响  22-23
3 讨论  23-32
全文总结  32-33
附图  33-36
参考文献  36-43
文献综述  43-55
致谢  55-56
攻读学位期间发表论文  56

丙泊酚对发育中大脑皮层神经元细胞活性及凋亡的影响

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