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中国野生百合资源调查及遗传多样性分析

作　者: 王洁琼
导　师: 张启翔
学　校: 北京林业大学
专　业: 园林植物与观赏园艺
关键词: 野生百合资源遗传多样性 AFLP cpSSR
分类号: S682.29
类　型: 硕士论文
年　份: 2006年
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内容摘要

百合(Lilium)，百合科多年生球根草本植物，是我国传统名花，适于做切花、盆花和园林布景。全世界有90多种，中国有46种18变种，其中原产36种15变种。中国野生百合存在大量变异、遗传多样性丰富，但目前很多资源没有得到利用，且破坏流失严重、多样性逐渐降低，亟待保护。针对这一问题，作者对东北长白山、云南以及陕西部分地区的百合资源进行调查和收集，采用组织培养方法对采集的全部种球进行保存并采用AFLP和cpSSR两种分子标记方法研究采集的50份样品的遗传多样性。主要结论如下。 1．二年来收集到东北长白山、云南大理、丽江、中甸以及陕西太白山的野生百合36种。采自三地百合数量分别为：8种、16种、7种，其余的5种来自北京、福建等地。调查中观察到由于人为挖取百合作食用、药用、观赏以及生境的进一步恶劣等原因，使得野外百合资源存在情况非常严峻。以东北情况最为严重，其次是云南，目前亟需对野生百合尤其是一些特有种进行保护。 2．为更好的利用百合资源，尤其是为百合育种提供理论依据，本研究采用AFLP以及cpSSR标记方法研究百合遗传多样性。针对AFLP反应体系对DNA及模板的质量的严格要求，作者对传统的CTAB法进行了改进，以降低DNA中蛋白质及多糖的含量；同时对酶切时间设置处理，建立并优化百合AFLP反应体系。本研究以麝香百合、窄叶百合两种百合为材料从60对EcoRI／MseI AFLP引物对组合中筛选11对扩增效果较佳的引物用于百合的遗传多样性分析，并最终选择5对多态率高可用于全部材料的引物，产生条带189条，多态性条带123条，多态率为65.07％。各种的多态率集中在28.04％-42.32％之间。根据所得数据，采用相应指标分析中国野生百合遗传多样性，为进一步的研究野生百合提供分子水平上的依据。 3．从12对其他种已经合成的cpSSR特异引物对中筛选4对引物用于百合叶绿体SSR分析，共产生条带数12条，多态率为100％。对所得数据进行聚类，分析起遗传多样性。采用cpSSR方法是对AFLP标记方法的一个补充，同时也验证cpSSR这一分子标记方法在观赏植物中的应用是可行的。本研究首次采用AFLP标记方法分析百合遗传多样性反应体系并首次尝试将cpSSR分子标记方法应用到观赏植物中。对百合野生资源的收集、保存以及遗传多样性作了研究，为建立百合核心种质以及更好的利用资源打下基础。

全文目录

摘要  3-4
Abstract  4-5
目录  5-8
1.引言  8-18
  1.1 研究目的意义  8
  1.2 主要研究内容  8
  1.3 国内外研究现状及进展  8-18
    1.3.1 野生百合资源  8-9
    1.3.2 组培培养  9-10
    1.3.3 遗传多样分析  10-18
      1.3.3.1 百合形态标记研究  11-12
      1.3.3.2 几种常用分子标记技术  12-18
2.中国野生百合资源调查采集及保存  18-29
  2.1 资源采集  18-26
    2.1.1 部分采集百合种特征介绍  18-24
    2.1.2 部分野生百合生境  24-25
    2.1.3 野生百合资源现状评价  25-26
      2.1.3.1 百合种质资源保护的迫切性  25
      2.1.3.2 三地野生百合存在状况  25-26
  2.2.野生百合的保存  26-29
    2.2.1 材料  26
    2.2.2 试验方法  26
    2.2.3 结果分析  26-28
    2.2.4 小结  28-29
3.中国部分野生百合遗传多样性分析  29-55
  3.1 实验材料  29-31
  3.2 实验方法  31-37
    3.2.1 DNA的提取  31-32
      3.2.1.1 试验方法  31
      3.2.1.2 本试验对传统CTAB方法的改良  31
      3.2.1.3 DNA模板质量的检测方法  31-32
      3.2.1.4 影响DNA模板提取质量的几个因素的处理方案  32
    3.2.2 AFLP试验方法  32-37
      3.2.2.1 DNA的酶切  32-33
      3.2.2.2 扩增过程  33-35
      3.2.2.3 凝胶电泳检测  35-36
      3.2.2.4 银染检测  36
      3.2.2.5 统计分析  36-37
    3.2.3 cpSSR标记方法  37
      3.2.3.1 cpSSR反应体系  37
      3.2.3.2 凝胶检测  37
      3.2.3.3 数据记录分析  37
  3.3 结果与分析  37-53
    3.3.1 DNA提取结果分析  37-42
      3.3.1.1 不同叶片材料提取DNA模板质量的影响  37-38
      3.3.1.2 不同CTAB加入量对提取DNA模板质量的影响  38-39
      3.3.1.4 氯仿：异戊醇抽提次数对DNA模板质量影响的研究  39-41
      3.3.1.4 最终适合AFLP实验的DNA的获得  41-42
    3.3.2 AFLP结果与分析  42-49
      3.3.2.1 不同酶切时间的酶切效果  42-43
      3.3.2.2 不同引物的扩增效果  43-44
      3.3.2.3 指纹图谱与遗传多样性  44-49
    3.3.3 cpSSR结果与分析  49-53
      3.3.3.1 引物筛选  49-50
      3.3.3.2 Tag酶用量对cpSSR结果的影响  50
      3.3.3.3 指纹图谱与多态性位点比较  50-51
      3.3.3.4 数据分析  51
      3.3.3.5 聚类分析  51-53
  3.4 小结  53-55
4.结论与讨论  55-57
参考文献  57-62
附录  62-67
个人简介  67-68
导师简介  68-69
致谢  69

中国野生百合资源调查及遗传多样性分析

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