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妊娠标记蛋白PAPPA，PLAC8和PAG mRNA在妊娠奶牛外周血浆中的丰度变化

作　者: 郭宁
导　师: 王根林
学　校: 南京农业大学
专　业: 动物遗传育种与繁殖
关键词: 妊娠奶牛 胎儿游离RNA 妊娠相关蛋白A 妊娠特异蛋白8 妊娠结合糖蛋白 妊娠诊断
分类号: S858.23
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要


奶牛妊娠期特异表达蛋白可作为妊娠标记蛋白。本研究旨在探究妊娠相关血浆蛋白A (PAPPA)、妊娠特异蛋白8(PLAC8)和妊娠相关糖蛋白(PAG)三种妊娠标记蛋白在奶牛妊娠期外周血血浆中的表达规律,以筛选妊娠早期优势奶牛胎盘活性物质,为奶牛早期妊娠诊断提供依据。本研究采集奶牛空怀期、妊娠30d、60d、90d、150d和240d血浆,采用柱式病毒RNAout试剂盒提取血浆中游离的胎儿RNA,通过RT-PCR分析三种妊娠标记蛋白的mRNA的表达水平。本研究主要分为两个部分：一、奶牛外周血中游离胎儿RNA的提取由于血浆中胎儿游离RNA含量极少且存在形式特殊,提取出高质量的RNA存在着一定的困难,因此本试验中提取胎儿游离RNA是研究的一个重要环节。试验对比了常规RNA提取和柱式病毒RNAout试剂盒提取两种方法,结果显示：用普通的RNA提取方法不能获得血浆中游离的RNA,而采用柱式病毒RNAout试剂盒可以从血浆中提取出高质量的RNA。二、奶牛妊娠期外周血中PAPPA, PLAC8和PAG的mRNA表达规律在妊娠奶牛,PAPPA, PLAC8和PAG都可以作为一种妊娠标记蛋白。据目前的研究报道,PLAC8和PAG仅由胎盘组织分泌表达,具有妊娠特异性；PAPPA在其他组织也有微量表达,但表达水平远低于胎盘。本研究显示：(1)与空怀组相比,妊娠期血浆中的PAPPA的mRNA水平显著提高(P<0.05),而妊娠150d组与空怀组相比则差异极显著(P<0.01); (2) PLAC8是一种只在妊娠期表达的胎盘特异性蛋白,在未孕牛无表达,所以本试验以妊娠30d的数据为阴性对照,结果显示,其在妊娠150d表达量最高,在妊娠240d时表达量最低。而在妊娠早期,妊娠60d时表达量高于30d和90d。在妊娠中期(150d) PLAC8的表达量又逐渐增加并高于妊娠前期,随后又降至最低值；(3)与空怀期相比,在整个妊娠过程中PAG的mRNA表达量随妊娠期的延长而增加,妊娠30d、90d和150d显著高于空怀期(P<0.05),妊娠60d和240d时极显著地高于空怀期(P<0.01)。结论：本研究表明,PAG可作为奶牛妊娠早期优势表达蛋白,对其表达调节和功能进行深入研究,可为奶牛早期无创性妊娠诊断提供重要的理论依据及一种新的思路。

全文目录


摘要  7-9ABSTRACT  9-11缩略语中英文对照  11-12第一章 文献综述  12-30  1 奶牛早期妊娠诊断研究进展  12-16    1.1 超声波诊断法  12-13    1.2 血小板计数法  13    1.3 早孕因子诊断法  13-14    1.4 血清酸滴法  14    1.5 放射免疫和酶免疫测定法  14    1.6 碱性磷酸酶活力测定法  14-15    1.7 胶体金双抗夹心法  15    1.8 乳胶凝集抑制试验  15    1.9 宫颈-阴道粘液电导率测定法  15-16  2 基于外周血中胎儿游离RNA的奶牛早期妊娠诊断技术  16-19    2.1 母体外周血中胎儿游离RAN的发现  16-17    2.2 胎儿游离RNA的来源及其存在形式  17-18    2.3 研究现状和应用前景  18-19  3 奶牛胎盘活性物质的研究进展  19-21    3.1 调节肽  19-20    3.2 生长因子  20    3.3 细胞因子  20-21    3.4 其他生物活性物质  21  4 PAPPA,PLAC8和PAG的研究进展  21-23    4.1 妊娠相关血浆蛋白A(PAPPA)  21-22    4.2 妊娠特异蛋白8(PLAC8)  22    4.3 妊娠结合糖蛋白(PAG)  22-23  5 小结  23-24  参考文献  24-30试验一 奶牛外周血中游离胎儿RNA的提取  30-36  1 材料与方法  30-32    1.1 试验材料  30-31    1.2 试验方法  31-32  2 结果与分析  32-33    2.1 常规RNA提取检测结果  32    2.2 柱式病毒RNAout试剂盒检测结果  32-33  3 讨论  33-35  参考文献  35-36试验二 PAPPA,PLAC8和PAG的MRNA在妊娠奶牛外周血中的表达规律  36-54  1 材料与方法  37-39    1.1 试验材料  37-38    1.2 试验方法  38-39    1.3 数据分析  39  2 结果及分析  39-44    2.1 RT-PCR产物特异性  39    2.2 PAPPA,PLAC8和PAG的mRNA在奶牛妊娠期外周血中的表达规律  39-44  3 讨论  44-49    3.1 PAPPA  45-46    3.2 PLAC8  46    3.3 PAG  46-47    3.4 适于奶牛早期妊娠诊断的优势表达基因的筛选  47-49  参考文献  49-54全文结论  54-56致谢  56

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中图分类: > 农业科学 > 畜牧、动物医学、狩猎、蚕、蜂 > 动物医学（兽医学） > 各种家畜、家禽、野生动物的疾 > 家畜 > 牛
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