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孕酮单克隆抗体自包被固相放射免疫分析法的建立及其应用

作　者: 蔡志强
导　师: 徐步进
学　校: 浙江大学
专　业: 生物物理学
关键词: 孕酮（P4）孕酮单克隆抗体自包被固相放免分析法(Sc-RIA) D 早期妊娠诊断
分类号: R392
类　型: 硕士论文
年　份: 2001年
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内容摘要

类固醇激素—孕酮（P₄）在雌性动物生殖与妊娠维持过程中起着重要的作用。体液孕酮含量的测定，可用于早期妊娠诊断、不孕症诊断、发情鉴定、卵巢机能、繁殖障碍和产科疾病的研究；还可用来检查人工授精效果，进行激素试验，为遗传分析提供有效的生理指标等。目前国内对P₄的研究主要是采用液相放免分析法（³H-P₄）以及酶免疫分析法（EIA），但前者会产生需要进行特殊处理的废液，后者测定结果不够稳定，在实际应用中都存在一定问题。本研究建立了一种运用孕酮单克隆抗体自包被固相放免分析法（Self-coatingRIA Using Progesterone Mono-clonal Antibody，Sc-RIA）其灵敏度为0.06nmol/L，回收率达95.73％，批内CV6.8％，批间CV9.3％，与DPC有非常好的相关性。在研究中用90％乙醇作为固相样品-滤纸的抽提剂，得到滤纸样品中的³H-P₄和¹²⁵I-P₄回收率分别为95.01±0.80％和94.09±3.03％。按照Cerceo提出的“效点系统打分法”中的五项指标，对所建立的Sc-RIA方法进行评价，得分为31分（得分在28分以上为较优）。说明Sc-RIA可行、可靠。应用所建立的Sc-RIA，测定了正常发情奶牛，配种后怀孕奶牛和卵巢疾病奶牛奶清和滤纸样品中的孕酮含量的变化，结果表明奶清样中的孕酮变化和滤纸样中的孕酮变化趋势一致。正常奶牛发情周期中，奶清样与滤纸样孕酮的相关系数r=0.8792±0.070，且测得周期天数完全一致，为22±2.18天。两者于同一天达到谷点，在谷点处，滤纸样孕酮和奶清样孕酮的平均浓度分别为1.6481±0.6023nmol/L和0.3184±0.2549nmol/L。配种后奶牛滤纸样与奶清样孕酮变化趋势一致，其相关系数为0.9178±0.0053。卵巢疾病奶牛奶清样和滤纸样孕酮变化的相关系数为0.62。 Sc-RIA可于奶牛早期妊娠诊断。用奶清样测孕酮含量进行早期妊娠诊断，妊娠诊断准确率达89.47％，未孕诊断准确率达100％。用滤纸样测定牛奶中的孕酮含量进行早期妊娠诊断，妊娠诊断准确率达87.61％，未孕诊断准确率达95.47％。 Sc-RIA还可用于监测奶牛的发情、排卵、黄体功能等各种繁殖生理状态，从而进一步地提高奶牛的繁殖率，提高牧场的经济效益。

全文目录

致谢  3-4
中文摘要  4-6
前言  6-21
第一章材料、试剂与设备  21-23
  1．1 实验材料与试剂  21-22
  1．2 主要仪器设备  22-23
第二章自包被固相放射免疫分析法的建立与鉴定  23-39
  2．1 样品采集与制备  23-24
  2．2 孕酮的抽提  24
  2．3 孕酮单克隆抗体的稀释  24-26
  2．4 ~（125）I-孕酮的配制  26
  2．5 标准奶样的制备  26
  2．6 抗体的包被  26
  2．7 DPC和Sc-RIA标准曲线的制作  26-27
  2．8 Sc-RIA方法学的鉴定  27-31
  2．9 孕酮单克隆抗体6H11/14特异性  31-32
  2．10 DPC与Sc-RIA相关性比较  32-36
  2．11 奶清与滤纸中孕酮含量的相关性分析  36-37
  2．12 ~（125）I-孕酮稳定性  37
  2．13 质量评估  37-39
第三章方法学的应用  39-48
  3．1 奶牛发情周期中奶清孕酮与滤纸孕酮浓度的变化  39-42
  3．2 配种后怀孕奶牛  42-44
  3．3 早期妊娠诊断  44-45
  3．4 卵巢机能性疾病诊断  45-48
第四章讨论  48-52
  4．1 方法学建立部分  48-49
  4．2 方法的应用部分  49-52
第五章小结  52-53
参考文献  53-58
英文摘要  58-59

孕酮单克隆抗体自包被固相放射免疫分析法的建立及其应用

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