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PAF和PAF-AH检测对大熊猫（Ailuropoda melanoleuca）早孕诊断的可行性研究

作　者: 张守信
导　师: 郑鸿培；侯蓉
学　校: 四川农业大学
专　业: 动物遗传育种与繁殖
关键词: 大熊猫 妊娠诊断 血小板活化因子(PAF) PAF乙酰水解酶
分类号: S854.4
类　型: 硕士论文
年　份: 2004年
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内容摘要


本文建立了定量检测血小板活化因子（Platelet activating factor，PAF）的方法——血小板凝集生物学检测法，检测了大熊猫配种前后血浆中PAF的含量；采用酶水解底物显色法测定大熊猫配种前后PAF乙酰水解酶（PAF Acetylhydrolase，PAF-AH）活性，探讨了大熊猫血浆中PAF与早孕相关性血小板下降的关系，以及定量检测血浆PAF含量、PAF-AH活性应用于大熊猫早孕诊断的可行性。 在血小板凝集生物学检测法的建立中发现，薄层层析法纯化PAF的回收率为96.3％。适宜的血小板浓度范围为3.5～4.0×1011／L（此时有较大的聚集率）；在小于3.5×109／L时聚集率较低，大于4.0×109／L时聚集率变化大，结果不稳定。标准PAF诱导洗涤血小板聚集的线性范围为2／10ug／L。 本研究检测了大熊猫配种前后血浆中PAF含量与PAF-AH活性。若以大熊猫尿中雌激素水平陡然下降的当天或者首次能够进行自然交配的当天为0天，在0-2天连续采集大熊猫血浆样品，同时检测大熊猫外周血小板数。根据大熊猫外周血小板数的变化，将受试大熊猫分为外周血小板显著下降组和未显著下降组，研究发现，两组相比0天以后PAF值差异不显著（3.85±0.60 ug／L VS 3.79±0.76 ug／L，P＞0.05）；根据大熊猫产仔情况将大熊猫分为产仔组和未产仔组，比较后发现，1或2天大熊猫外周血中PAF值差异不显著（3.80±0.78 ug／L VS 3.79±0.76 ug／L，P＞0.05）。采用酶水解底物显色法检测大熊猫（n=2）配种前后血浆中的PAF-AH活性后，初步发现d血浆样品中PAF-AH活性下降[从12.42nmol．min-1．ml-1下降到10.27nmol．min-1．ml-1；从13.33nmol．min-1．ml-1下降到12.11 nmol．min-1．ml-1]。以上结果说明：通过检测大熊猫血浆中PAF含量进行大熊猫超早孕诊断，该途径难度较大，建议尝试其它途径继续该项研究。血浆PAF-AH活性可能在早期妊娠中有所变化，需要进一步探讨。

全文目录


摘要  6-7
第一部分 文献综述  7-20
  1 大熊猫妊娠诊断的研究进展  7-9
  2 血小板活化因子(PAF)与生殖  9-17
    2.1 PAF的生物学特性  9-11
    2.2 PAF的生物学活性  11-12
    2.3 PAF在生殖方面的研究  12-17
  3 PAF的检测方法  17-18
  4 PAF-AH与妊娠  18-20
第二部分 血小板凝集定量生物检测法的建立和应用  20-32
  1 试验材料  20-21
  2 试验方法  21-25
    2.1 样品采集与处理  21-22
    2.2 外周血小板计数  22
    2.3 PAF的提取  22-23
    2.4 PAF层析分离  23-24
    2.5 血小板悬液制备  24
    2.6 血小板聚集试验  24
    2.7 标准曲线与回归方程的建立  24-25
    2.8 大熊猫血浆中PAF的检测  25
    2.9 大熊猫血浆PAF检测的阴性对照  25
  3 结果分析  25-28
    3.1 方法建立的结果  25-27
    3.2 大熊猫血浆中PAF的测定  27-28
  4 讨论  28-31
    4.1 血小板凝集生物学法的建立  28-29
    4.2 层析分离物的鉴定  29-30
    4.3 PAF与早孕相关性血小板减少  30-31
    4.4 PAF与早期妊娠  31
  5 结论  31-32
第三部分 大熊猫血浆中PAF-AH的检测  32-37
  1 试验材料  32
  2 试验方法  32-34
    2.1 血浆样品的浓缩  32
    2.2 检测前试剂盒的处理  32-33
    2.3 样品检测  33
    2.4 空白孔和阳性孔  33
    2.5 PAF-AH活性的计算  33-34
  3 PAF-AH检测结果  34-35
    3.1 人标准PAF-AH检测  34
    3.2 大熊猫血浆PAF-AH检测结果  34-35
  4 讨论  35-36
    4.1 PAF-AH的检测  35
    4.2 PAF-AH与PAF  35
    4.3 PAF-AH与妊娠  35-36
  5 结论  36-37
结语  37-38
参考文献  38-45
英文摘要  45-47
致谢  47

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中图分类: > 农业科学 > 畜牧、动物医学、狩猎、蚕、蜂 > 动物医学（兽医学） > 兽医临床医学 > 兽医诊断学
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