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FucT-Ⅶ上调内皮细胞中粘蛋白endomucin糖基化影响单核细胞对其粘附机制研究

作　者: 琚娜娜
导　师: 于超
学　校: 重庆医科大学
专　业: 药物化学
关键词: 岩藻糖基转移酶 sLex endomucin 细胞粘附 sLex修饰
分类号: R96
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

血管内皮细胞是连续覆盖在全身血管内膜的一层细胞群,研究发现内皮层不仅仅是血液和组织的屏障，还具有其他多种功能，鉴于这些生理功能，血管内皮细胞的损伤是诸如动脉粥样硬化、高血压、糖尿病等的始动环节。炎症反应中内皮细胞与单核细胞的粘附这一过程涉及单核-内皮细胞诸多粘附分子，不仅与细胞表面的粘附分子表达量有关，同时可能与相关因子的翻译后修饰（如糖基化）有关，因此探讨内皮细胞膜上功能蛋白的糖基化与功能的关系对揭示内皮-单核细胞相互作用机制起着至关重要的作用。唾液酸化的路易斯酸X（sialyl-Lewis X，sLex）是一种岩藻糖基化产物，参与机体的一些疾病发生过程中，其中炎症反应中sLex与选择素的粘附作用是关键步骤。sLex糖支链是唾液酸化蛋白合成的最后一步，是在岩藻糖基转移酶家族（FucT）的催化作用下，将岩藻糖以α1,3-糖苷键的形式连接到N-乙酰葡萄糖胺上形成，根据细胞类型的不同，FucT家族可能为FucT-Ⅲ, Ⅳ, Ⅴ, Ⅵ及Ⅶ等。细胞表面粘蛋白endomucin的糖链部分在内皮细胞与单核细胞粘附过程中发挥重要作用。在本研究中，我们发现FucT-Ⅶ及其催化产物sLex与炎症反应有关：通过细胞粘附实验，我们观察到IL-1β处理细胞后内皮细胞与单核细胞粘附能力增强；qRT-PCR及western blot方法检测到在IL-1β诱导的炎症模型中FucT-Ⅶ及其催化产物sLex表达量均相应上调。采用FucT-Ⅶ基因干扰及过表达质粒转染EA.hy926细胞，结果表明FucT-Ⅶ的表达量与细胞粘附能力呈正相关，与炎症因子处理的结果相似。同时还发现FucT-Ⅶ干扰可阻滞内皮细胞中IL-1β诱导的FucT-Ⅶ及sLex蛋白量上调，而且降低了IL-1β诱导的细胞粘附能力的增强。通过特异性抗体封闭粘蛋白endomucin及sLex，可以抑制由于FucT-Ⅶ过表达质粒转染细胞所增强的内皮细胞的粘附能力。western blot方法检测到IL-1β处理或FucT-Ⅶ过表达质粒转染细胞增加endomucin表面sLex糖链修饰，但并不影响内皮细胞内endomucin蛋白表达。在相关的信号通路研究中，我们发现与单独给予IL-1β处理组相比，SB203580及PD98059显著阻滞IL-1β处理所致的FucT-Ⅶ表达量上调，而且减少了炎症因子IL-1β诱导的内皮细胞-单核细胞粘附能力增强。基于上述实验结果，我们推断P38-ERK信号通路可能通过调控FucT-Ⅶ表达从而影响endomucin粘蛋白介导的内皮细胞-单核细胞粘附。综上所述，本研究首次初步阐明粘蛋白endomucin通过FucT-Ⅶ催化的糖基化作用可能是调控内皮细胞-单核细胞粘附的始动机制之一，FucT-Ⅶ可能成为防治内皮细胞-单核细胞粘附聚集的有效靶点，为临床上相关疾病的炎症诱发机制研究提供实验依据。

全文目录

英汉缩略语名词对照  5-7
中文摘要  7-9
英文摘要  9-12
前言  12-14
第一部分 IL-1β介导 FucT-Ⅶ影响内皮细胞-单核细胞粘附  14-24
  1 材料与方法  14-17
  2 结果  17-22
  3 讨论  22-24
第二部分 FucT-Ⅶ通过 endomucin 的糖基化修饰调控内皮细胞-单核细胞的粘附  24-32
  1 材料与方法  24-27
  2 结果  27-30
  3 讨论  30-32
第三部分探讨 IL-1β介导 FucT 影响内皮细胞-单核细胞粘附的分子机制  32-38
  1 材料与方法  32-34
  2 结果  34-36
  3 讨论  36-38
全文总结  38-40
参考文献  40-44
文献综述  44-51
  参考文献  47-51
致谢  51-52
攻读硕士学位期间发表的论文  52-53

FucT-Ⅶ上调内皮细胞中粘蛋白endomucin糖基化影响单核细胞对其粘附机制研究

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