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EGCG对HepG2肝癌细胞跨内皮迁移的影响及机制研究

作　者: 廖音娟
导　师: 胡长平
学　校: 中南大学
专　业: 药理学
关键词: 植物凝集素样氧化性低密度脂蛋白受体-1 转移内皮细胞粘附迁移肝癌
分类号: R735.7
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)是一种全球常见的恶性肿瘤,尤其高发于亚洲和非洲等地。虽然在过去的20年中,肝癌的诊断和治疗方法有了较大发展,但是由于肝癌具有肝内转移、静脉侵袭以及远距离转移等特性,其术后复发率和死亡率仍然很高。肿瘤细胞与血管内皮细胞的粘附及其随后的跨内皮迁移在癌症转移中起关键作用。植物凝集素样氧化性低密度脂蛋白受体-1(lectin-like oxidized low density lipoprotein receptor-1, LOX-1)是1997年由Sawamura等人首次从牛主动脉内皮细胞中克隆出来的C型外源凝集素家族膜蛋白。它是血管内皮细胞摄取和代谢ox-LDL的主要受体,在前炎症信号、内皮功能紊乱以及动脉硬化中起着重要作用。研究表明,LOX-1可能作为粘附分子,介导癌细胞和内皮细胞的相互作用。EGCG是儿茶素中的主要成分,对肝癌具有确切的治疗和预防作用,但EGCG直接参与抗肿瘤的分子机制和作用靶点尚未得到充分研究。本实验将探讨EGCG对肝癌细胞跨内皮迁移的作用及机制。实验分设正常对照组、TNF-α损伤组、3个浓度的EGCG (5、10和20μM)+TNF-a组、anti-LOX-1+TNF-α组、EGCG (20μM)组和anti-LOX-1组。各药物处理组预先孵育处于对数生长期的HUVEC-C细胞株2 h,再用TNF-α(50ng/ml)处理8h。接种HepG2肝癌细胞后粘附实验检测肝癌细胞与内皮细胞的粘附能力；Transwell小室法检测肝癌细胞跨内皮迁移的能力；real time PCR检测HUVEC-C细胞中LOX-1 mRNA表达水平；Western Blot检测HUVEC-C细胞中LOX-1蛋白表达水平。结果1、1-50 ng/ml TNF-α浓度依赖性地上调LOX-1 mRNA表达,其中,50ng/ml TNF-α作用HUVEC-C细胞8h时,LOX-1 mRNA水平上调6.67倍2、1-50 ng/ml TNF-α浓度依赖性地上调LOX-1蛋白表达。3、TNF-α(50 ng/ml)处理HUVEC-C细胞8 h,能够明显促进HepG2肝癌细胞与内皮细胞粘附,EGCG(5、10和20μM)预处理2h能显著抑制TNF-α诱导的粘附作用,且呈浓度依赖性。LOX-1中和抗体也显著抑制TNF-α诱导的粘附作用。4、TNF-α(50ng/ml)处理HUVEC-C细胞8 h,能够明显促进HepG2肝癌细胞跨内皮迁移,EGCG(5、10和20μM)预处理2h能显著抑制TNF-α诱导的迁移作用,且呈浓度依赖性。LOX-1中和抗体也显著抑制TNF-α诱导的迁移作用。5、TNF-α(50 ng/ml)处理HUVEC-C细胞8 h,可显著上调LOX-1mRNA的表达,EGCG预处理2h能浓度依赖性地抑制TNF-α所致LOX-1 mRNA表达的上调。6. TNF-α(50 ng/ml)处理]HUVEC-C细胞8h,可显著上调LOX-1蛋白的表达,EGCG预处理2h能抑制TNF-α所致LOX-1蛋白表达的上调。结论EGCG通过减少LOX-1的表达能明显抑制TNF-α诱导的肝癌细胞与内皮细胞的粘附及随后的跨内皮迁移。LOX-1可能作为一种粘附分子,介导了肝癌细胞与内皮细胞的相互作用。

EGCG对HepG2肝癌细胞跨内皮迁移的影响及机制研究

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