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聚乙二醇修饰的抗粘附多肽YIGSR对肝癌细胞粘附能力的影响

作　者: 王德兴
导　师: 王艳红
学　校: 复旦大学
专　业: 内科学
关键词: 肝细胞肝癌 MHCC97H YIGSR PEG 细胞粘附
分类号: R735.7
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

目的：抗粘附多肽YIGSR(酪-异亮-甘-丝-精)对肝癌细胞有抗粘附作用,但因其分子小、半衰期短,限制了实际应用。本研究拟用PEG修饰抗粘附多肽YIGSR,通过检测偶联物PEG-YIGSR的稳定性、在大鼠血清中的降解率、以及对人肝癌细胞的粘附抑制作用,了解抗粘附多肽YIGSR被PEG修饰后能否克服分子小、半衰期短的劣势,同时依然保留其原有的对人肝癌细胞的粘附抑制作用。为临床应用提供实验依据。方法：用液-质联用分析方法(LC-MS)检测不同pH值环境下、不同温度下、以及不同偶联浓度下,PEG与YIGSR的偶联率及偶联物PEG-YIGSR的稳定性。用SD大鼠血清检测偶联物PEG-YIGSR的体外降解速度及药时曲线下面积(AUC)；用体外细胞-基质粘附试验方法,检测PEG-YIGSR对人肝癌细胞MHCC97H的粘附抑制率。结果：1.当pH变化于4.0～6.0之间时,PEG对YIGSR的修饰率均在99%以上；其中以pH5.0最高,修饰率为99.999%；pH 4.0最低,修饰率为99.5%。2.在pH为5.0的恒定条件下,随着mPEG-ALD10000修饰剂量的增加,PEG对YIGSR的修饰率逐渐提高；PEG与YIGSR的摩尔比浓度从1：1增加至10：1时,修饰率从62.5%增加至99.999%。3.PEG-YIGSR在大鼠血清中的体外降解速度明显慢于YIGSR。(1)血清中分别加入YIGSR和PEG-YIGSR后,于不同时间点取样,检测血清中YIGSR的残留浓度。结果显示,15min时,YIGSR组血清中YIGSR浓度小于0.44mg/L,20min时,译检测不到YIGSR。而15min时,PEG-YIGSR组YIGSR的浓度为1.77mg/L；60min时浓度为O.11mg/L；此时,再将PEG-YIGSR进行去PEG化后再次测定样品中YIGSR的浓度增加了1.04 mg/L(1.75μmol/L),可以粗略估计样品中此时的PEG-YIGSR浓度可能大于200μmol/L,提示PEG化明显延长了YIGSR发挥作用的时间。(2) YIGSR与PEG-YIGSR两组中游离YIGSR的药时曲线下面积AUC分别为1146±47mg-min/1和1249±68mg-min/1,数据有显著性差异,P=0.035。4.PEG修饰YIGSR后不影响后者原有的对肿瘤细胞的粘附抑制能力。(1) 336μmol/L PEG-YIGSR和YIGSR对人肝癌细胞基质粘附抑制率分别为(19.5±4.5)%和(20.1±4.3)%,(p>0.05)。提示,PEG-YIGSR保持了细胞粘附抑制能力。(2)不同浓度(336μmol/L、168μmol/L、84μmol/L、42μmol/L)的PEG-YIGSR对肝癌细胞的粘附抑制率依次为19.5%±4.5%、11.4%±4.1%、9.8%±2.7%、8.4%±3.6%；组间有显著差异,P<0.05。浓度为336μmol/L的PEG-YIGSR分别作用细胞1h,2h,3h时,其粘附抑制率分别为5.2%±2.5%、10.5%±3.3%、19.5%±4.5%,P<0.05。提示,粘附抑制率随着药物浓度和作用时间的增加而增加。结论：1.PEG修饰YIGSR的方法不仅简单易行,修饰效率高,而且比较稳定。2.PEG修饰YIGSR后保留了其原有抑制肿瘤细胞粘附的作用。3. PEG-YIGSR在体外血清中的降解速率减慢,有助于延长YIGSR发挥作用的时间。

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中文摘要  4-6
Abstract  6-8
引言  8-10
第一部分抗粘附多肽YIGSR的聚乙二醇化去聚乙二醇化研究  10-23
  材料与方法  10-16
  结果  16-19
  讨论  19-21
  结论  21-22
  参考文献  22-23
第二部分 PEG-YIGSR的体外粘附抑制作用及大鼠血清降解研究  23-38
  材料与方法  23-30
  结果  30-34
  讨论  34-35
  结论  35-36
  参考文献  36-38
综述层粘连蛋白的研究进展  38-48
  参考文献  44-48
附录已发表文章  48-59
致谢  59-60

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