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B7-H3在前列腺癌中表达的临床意义及作用机制初探

作　者: 魏雪栋
导　师: 侯建全
学　校: 苏州大学
专　业: 外科学
关键词: 前列腺前列腺肿瘤酶联免疫吸附 B7-H3 RNA干扰 PC-3 细胞粘附细胞迁移抑制肿瘤侵犯
分类号: R737.25
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

目的:检测并分析前列腺癌(prostate cancer,PCa)组织中B7-H3的表达及其临床意义。鉴定靶向人B7-H3 mRNA的siRNA干扰效率及有效时限。探索B7-H3表达下降对人前列腺癌PC-3细胞生物学功能的影响。方法:实验共分三部分1.收集19例前列腺癌组织标本,同时以19例良性前列腺增生(benign prostatic hyperplasis,BPH)组织标本作对照,制备组织抽提液。运用酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测前列腺癌及前列腺增生组织中B7-H3的表达情况,并分析其临床意义。2.运用靶向人B7-H3 mRNA的siRNA转染人前列腺癌PC-3细胞,通过实时定量PCR(Real-time PCR)及流式细胞技术(flow cytometry,FCM)检测转染后24、48、72小时各组PC-3细胞B7-H3 mRNA及蛋白的表达情况,鉴定其干扰效率及有效时限。实验分为三组:空白对照组(不转染组)、阴性对照组(NC siRNA组)以及实验组(B7-H3 siRNA组)。3.噻唑蓝比色法(MTT法)测定细胞生长率,绘制生长曲线;基质-细胞粘附实验检测细胞粘附能力;划痕实验检测细胞水平迁移能力;Transwell侵袭实验检测细胞侵袭力。结果:1.(1)B7-H3在前列腺癌组织抽提液中的水平(4.44±1.70ng/ml)高于前列腺增生(2.59±1.55ng/ml),差异有统计学意义(P=0.001)。(2)术前PSA≥20ng/ml的患者肿瘤组织抽提液中B7-H3水平与<20ng/ml的患者间差异无统计学意义(P=0.110)。(3)分期编组为III~IV期的患者肿瘤组织抽提液中B7-H3水平高于II期编组的患者,差异有统计学意义(P=0.020)。(4)术后Gleason评分8~10分的患者肿瘤组织抽提液中B7-H3水平高于≤7分的患者,差异有统计学意义(P=0.001)。2.(1)siRNA转染后24、48、72小时,实验组B7-H3 mRNA的表达水平分别为同时间点阴性对照组的39.53±7.11%、29.23±6.72%、33.37±5.47%,差异均有统计学意义(P均<0.01)。空白对照、阴性对照两组间B7-H3 mRNA表达水平差异均无统计学意义(P均>0.05)。(2)实验组细胞表面B7-H3分子表达率分别为同时间点阴性对照组细胞表面的40.12±5.11%、31.62±3.15%、27.06±2.10%,差异均有统计学意义(P均<0.01)。空白对照、阴性对照两组PC-3细胞表面B7-H3分子表达差异均无统计学意义(P均>0.05)。3.(1)生长率测定结果显示,空白对照组、阴性对照组及实验组PC-3细胞转染后0、24、48、72小时四个时间点MTT实验所测OD值差异均无统计学意义(F=1.528,P=0.291;F=0.017,P=0.983;F=0.012,P=0.988;F=0.352,P=0.717)。(2)细胞-基质粘附实验结果显示,实验组PC-3细胞粘附能力低于空白对照组和阴性对照组,差异均有统计学意义(P均<0.01),而空白对照组和阴性对照组PC-3细胞之间差异无统计学意义(P>0.05)(3)划痕后12、18、24小时,实验组划痕相对宽度均大于空白对照组及阴性对照组,差异均有统计学意义(P均<0.05)。而后两组间差异均无统计学意义(P均>0.05)。(4)Transwell实验结果显示,实验组过膜细胞数少于空白对照组及阴性对照组,差异均有统计学意义(P<0.01),而后两组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论:(1)B7-H3在前列腺癌组织中的表达水平显著高于前列腺增生组织,并且与肿瘤的分期编组级别以及术后Gleason评分呈正相关。提示B7-H3在前列腺癌的发生、发展过程中起重要作用。(2)转染后72小时内靶向人B7-H3 mRNA的siRNA能有效抑制人前列腺癌PC-3细胞的B7-H3 mRNA及相应蛋白表达,能满足下一步实验要求。(3)B7-H3表达下降对PC-3细胞生长率无显著影响,但可以明显抑制PC-3细胞的粘附、水平迁移以及侵袭能力。这说明,B7-H3除了可以作为免疫调节分子发挥作用外,还可以另一种方式调节PC-3细胞的生物学功能。

全文目录

中文摘要  4-6
Abstract  6-11
前言  11-16
  参考文献  12-16
第一部分 B7-H3 分子在前列腺癌中的表达及其临床意义  16-25
  引言  16
  材料与方法  16-21
  结果  21-22
  讨论  22-23
  小结  23-24
  参考文献  24-25
第二部分靶向人B7-H3 mRNA 的siRNA 对人前列腺癌PC-3 细胞的转染及鉴定  25-37
  引言  25
  材料与方法  25-32
  结果  32-35
  讨论  35
  小结  35-36
  参考文献  36-37
第三部分 siRNA 干扰B7-H3 基因表达对人前列腺癌PC-3 细胞生物学功能影响的体外研究  37-48
  引言  37
  材料与方法  37-40
  结果  40-44
  讨论  44-45
  小结  45
  参考文献  45-48
全文总结  48-49
文献综述  49-63
  参考文献  56-63
攻读学位期间公开发表的论文  63-64
主要缩略词表  64-66
课题资助  66-67
致谢  67-69

B7-H3在前列腺癌中表达的临床意义及作用机制初探

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