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缺氧/复氧损伤和高糖浓度对心肌细胞的内质网应激作用研究

作　者: 吴章英
导　师: 邱原刚
学　校: 浙江大学
专　业: 内科学
关键词: 缺氧/复氧高糖心肌细胞内质网应激心肌肥大
分类号: R363
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
下　载: 37次
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内容摘要

内质网在细胞内具有重要的生理功能,包括负责正确折叠蛋白质的合成、转运、信号肽识别和糖基化修饰。然而当内质网摄取、释放Ca2+紊乱或者蛋白质的加工运输障碍时，会引起内质网应激反应(endoplasmic reticulum stress,ERS)。研究发现ERS参与了很多疾病的发生,如糖尿病、肥胖和肿瘤等,同时还介导心脏缺血/再灌注(ischemic/reperfusion,I/R)损伤。葡萄糖调节蛋白78(glucose regulated protein 78kD.GRP78)是应激诱导的内质网预留蛋白,被认为是内质网稳态的中心调节剂,也是内质网应激的标志蛋白,在内质网应激反应中具有保护细胞DNA免受损伤的作用。本实验通过观测内质网应激信号分子GRP78在蛋白表达水平的变化,以及细胞活性和形态学的改变,来探讨缺氧/复氧损伤和高糖浓度对心肌细胞所引起的内质网应激作用。目的：观察大鼠心肌细胞缺氧/复氧和高糖浓度时内质网应激蛋白表达以及细胞活性的改变及其意义,以探讨内质网应激反应与心肌细胞缺血再灌注损伤和糖浓度变化的关系。方法：原代培养乳鼠心肌细胞,缺氧6h后复氧0h、12h制备缺氧复氧损伤模型,使用葡萄糖浓度为25mmol/L的培养基培养24h制备高糖损伤模型,1mg/L衣霉素孵育心肌细胞作为本实验的阳性对照，使用相差倒置显微镜观察心肌细胞搏动状况,HE染色观察心肌细胞形态变化,并用Western blot(?)去检测GRP78表达水平,并检测细胞活性。结果：缺氧/复氧处理的心肌细胞存活率降低,搏动次数减少,与对照组比较,缺氧6h后心肌细胞内质网应激蛋白GRP78有显著增加,为对照组的144%,复氧12h后蛋白水平为对照组的297%。高糖组内质网应激蛋白GRP78的蛋白水平对照组的195%,心肌细胞活性和搏动次数与对照组相比增加。结论：缺氧/复氧和高糖浓度可以诱导心肌细胞的内质网应激。

全文目录

致谢  4-5
中文摘要  5-7
英文摘要  7-9
目录  9-10
第一部分缺氧/复氧对心肌细胞内质网应激的作用  10-25
  1 引言  10-12
  2 材料和方法  12-19
  3 结果  19-23
  4 讨论  23-25
第二部分高糖诱导心肌细胞的内质网应激作用  25-39
  1 引言  25-26
  2 材料和方法  26-33
  3 结果  33-37
  4 讨论  37-39
全文结论  39-40
参考文献  40-44
综述  44-55
  参考文献  50-55
作者简历及在学期间发表的文章  55

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