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内质网应激预处理对脑缺血再灌注损伤大鼠海马神经元的保护作用研究

作　者: 张春雪
导　师: 闵连秋
学　校: 辽宁医学院
专　业: 神经病学
关键词: 2-脱氧葡萄糖 内质网应激 大鼠 动物模型
分类号: R743.3
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要


目的应用内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)诱导剂2-脱氧葡萄糖(2-Deoxyglucose, 2-DG)对脑缺血再灌注(ischemia-reperfusion,I/R)模型大鼠进行预处理,观察海马神经元的损伤状况和ERS相关分子GRP78、XBP-1的表达,旨在探讨:一、2-DG诱导ERS预处理的最佳剂量;二、ERS预处理对脑I/R损伤的保护作用及其可能机制。方法选用成年雄性健康Sprague-Dawley(SD)大鼠360只,辽宁医学院实验动物中心提供,体重180-240g。随机分成6组,每组60只大鼠:假手术组、I/R组、2-DG组分为4个剂量组(2-DG:50mg/kg、100mg/kg、150mg/kg和200mg/kg),各组再按3h、6h、12h、24h、48h五个时间点分为四个亚组,每组12只大鼠,并于再灌注后相应时间点处死大鼠。2-DG溶于双蒸水,工作浓度为50mg/mL。2-DG组的大鼠各分为四个剂量组,分别按照50mg/kg、100mg/kg、150mg/kg、200mg/kg的剂量进行腹腔注射,每天1次,连续7天;I/R组和假手术组给予相同体积的双蒸水替代2-DG腹腔注射,每天1次,连续7天。最后一次腹腔注射后两小时进行造模,脑缺血后2h进行再灌注,再灌注后相应时间点进行神经行为学评分并处死大鼠。HE染色及免疫组化、RT-PCR、western blot法检测GRP78和XBP-1的表达。结果与I/R组相比,2-DG各剂量组大鼠的神经行为学评分明显减低(P<0.01),而以100 mg/kg组评分减低最为明显(P<0.05);同时亦发现,2-DG各剂量组能不同程度的改善大鼠脑海马CA1区神经细胞的核深染、核固缩程度,减少细胞及间质的水肿,使胞膜趋于清楚、形态接近正常、核仁清晰可见的神经细胞数目增多,而以2-DG100 mg/kg组的效果最为明显。2-DG各剂量组GRP78蛋白表达明显增加,与I/R组比较,差异有显著性(P<0.01),提示神经元发生了ERS;而以100 mg/kg剂量组的GRP78蛋白表达最高,与其他2-DG剂量组比较差异有显著性(P<0.05)。与I/R组相比,2-DG100 mg/kg组各时间点大鼠的神经行为学评分明显减低(P<0.01),2-DG100 mg/kg 12h组评分最低;同时亦发现,2-DG100 mg/kg组各时间点能不同程度的改善大鼠脑海马CA1区神经细胞的核深染、核固缩程度,减少细胞及间质的水肿,使胞膜趋于清楚、形态接近正常、核仁清晰可见的神经细胞数目增多,而以2-DG100 mg/kg 12h组的效果最为明显。与I/R组比较,2-DG100 mg/kg组各时间点GRP78蛋白表达明显增加,差异有显著性(P<0.01),2-DG100 mg/kg 12h组表达最高,提示神经元发生了ERS,2-DG起到了ERS的诱导剂的作用,提示ERS预处理对I/R后海马神经元具有保护作用;ERS预处理能诱导脑缺血耐受。与假手术组比较,I/R组和2-DG100mg/kg组各时间点的GRP78蛋白、XBP-1蛋白表达明显增加(P<0.01);与I/R组比较,2-DG100mg/kg组各时间点的GRP78蛋白、XBP-1蛋白表达明显增加(P<0.01),12h组的表达最高;与假手术组比较,I/R组和2-DG100mg/kg组各时间点的GRP78mRNA、XBP-1 mRNA表达明显增加(P<0.01);与I/R组比较,2-DG100mg/kg组各时间点的GRP78mRNA、XBP-1 mRNA表达明显增加(P<0.01),12h组的表达最高;提示XBP-1——GRp78途径活化可能是ERS预处理保护作用的重要机制。结论1、2-DG能成功诱导ERS预处理,其最佳剂量可能为100mg;2、ERS预处理能诱导脑缺血耐受;3、ERS预处理对I/R后海马神经元具有保护作用;4、XBP-1——GRp78途径活化可能是ERS预处理保护作用的重要机制。

全文目录


摘要  4-6
英文摘要  6-9
英文缩略语表  9-10
前言  10-11
实验材料与方法  11-16
实验结果  16-19
讨论  19-22
结论  22
参考文献  22-26
附图  26-34
综述  34-45
  参考文献  40-45
在学期间科研成绩  45-46
致谢  46-47
个人简介  47-48

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中图分类: > 医药、卫生 > 神经病学与精神病学 > 神经病学 > 脑血管疾病 > 急性脑血管疾病（中风）
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