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窖蛋白-1在波动性高糖诱导的内皮细胞氧化应激损伤中的作用及机制

作　者: 王茜
导　师: 杜建玲
学　校: 大连医科大学
专　业: 内科学
关键词: 内皮功能障碍 氧化应激 波动性高糖 窖蛋白-1 蛋白激酶C
分类号: R587.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要


目的:探讨波动性高糖对人脐静脉内皮细胞(Human Umbilical Vein Endothelial Cells, HUVECs)窖蛋白(Caveolin-1, Cav-1)的影响,及其在波动性高糖诱导的氧化应激损伤中的作用和机制,为深入研究糖毒性致内皮细胞损伤的机制提供新的实验依据。方法:HUVECs在含5.5 mM D-葡萄糖(正常组,NG)、20mM D-葡萄糖(高糖组,HG)、20/5.5 mM D-葡萄糖(波动组,IG)的培养液及含14.5 mM甘露醇(甘露醇组,MG)的培养液中培养2d、7d及14d,观察各组细胞形态学变化;收集各组细胞总的培养液,用硫代巴比妥酸法测定丙二醛(Malondialdehyde,MDA)的含量,用黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase,SOD)的活力。提取各组细胞RNA及蛋白,采用实时定量PCR方法检测Cav-1、PKCα及PKCβ2的mRNA表达;Western blot方法检测Cav-1、PKCα及PKCβ2的蛋白表达。实验数据用SPSS16.0进行统计学分析。结果:1.各组细胞形态学变化2d后,NG组和MG细胞轮廓清晰,多呈梭形,胞质胞核清晰可见;与NG组相比,HG细胞胞体增大,呈铺路石样,胞质增多,能看到零星的细胞分泌的黑色小颗粒样代谢产物;IG体积增大,排列紊乱、胞质及胞核界限不清且胞核大小稍不等,黑色小颗粒样代谢产物增多。随着培养时间的延长,7d、14d HG、IG细胞形态较2d变化更加明显。2.MDA含量:各组HUVECs暴露于不同条件培养基2d后与NG相比,HG、IG细胞培养液MDA含量有所升高(P<0.01),但IG与HG相比无差异(P>0.05);7d、14d后HG、IG细胞培养液MDA含量与NG相比进一步升高(P<0.01),且IG高于HG(P<0.05)。随着时间的延长,7d HG、IG MDA含量表达较2d有所升高(P<0.05);14d HG、IG MDA含量较2d升高(P<0.01),较7d进一步升高(P<0.05)。无论处理2d、7d还是14d,MG细胞培养液MDA含量与NG相比均无差异(P>0.05)。3.SOD活力(U/ml):各组HUVECs暴露于不同条件培养基2d后,与NG相比,HG、IG细胞培养液SOD活力有所减弱(P<0.05),但IG细胞培养液SOD含量与HG相比无差异(P>0.05);处理7d、14d后HG、IG细胞上清SOD活力与NG相比明显减弱(P<0.01),且IG细胞培养液SOD含量较HG进一步减低(P<0.05)。随着时间的延长,7d HG、IG SOD活力表达较2d有所减低(P<0.05);14d HG、IG SOD活力表达较2d减低(P<0.01),较7d进一步减低(P<0.05)。无论处理2d、7d还是14d,MG细胞培养液SOD活力与NG相比均无差异(P>0.05)。4.Cav-1的表达:不同条件处理2d后,Cav-1mRNA及蛋白表达在HG、IG均较NG升高(P<0.05),但IG与HG之间无差异(P>0.05);处理7d、14d后Cav-1mRNA及蛋白表达在HG、IG均较NG升高(P<0.01),且IG表达高于HG(P<0.05)。随着时间的延长,7d HG、IG Cav-1mRNA及蛋白表达较2d有所升高(P<0.05);14d HG、IG Cav-1mRNA及蛋白表达较2d升高(P<0.01),较7d进一步升高(P<0.05)。无论处理2d、7d还是14d,MG Cav-1mRNA及蛋白表达与NG相比均无差异(P>0.05)。5.PKCα的表达:各时间点、各组间及组内PKCαmRNA及蛋白表达均无统计学差异(P>0.05)。6.PKCβ2的表达:不同条件处理2d后,PKCβ2mRNA及蛋白表达在HG、IG均较NG升高(P<0.05),但IG与HG之间无差异(P>0.05);处理7d、14d后PKCβ2 mRNA及蛋白表达在HG、IG均较NG升高(P<0.01),且IG高于HG(P<0.05)。随着时间的延长,7d HG、IG PKCβ2 mRNA及蛋白表达较2d有所升高(P<0.05);14d HG、IG PKCβ2 mRNA及蛋白表达较2d升高(P<0.01),较7d进一步升高(P<0.05)。无论处理2d、7d还是14d,MG PKCβ2 mRNA及蛋白表达与NG相比无差异(P>0.05)。结论:1.波动性高糖通过PKCβ2信号通路诱导HUVECs氧化应激反应,导致血管内皮细胞损伤。波动性高糖较持续性高糖所产生的糖毒性效应更为强烈。2.波动性高糖促进HUVECs Cav-1的表达。说明Cav-1在高糖诱导内皮细胞损伤过程中可能发挥着重要作用。3.波动性高糖对Cav-1和PKCβ2的影响呈现相同的趋势,可能是波动性高糖诱导的氧化应激通过PKCβ2-Cav-1途径发挥作用,或Cav-1表达的增加是为了使细胞免于PKCβ2引起的氧化应激损伤而产生的适应性调节。4.无论持续性高糖还是波动性高糖,对内皮细胞的氧化应激损伤及PKCβ2、Cav-1表达的影响都具有时间依赖性,提示尽早解除高糖毒性非常重要。

全文目录


一、摘要  6-11  （一） 中文摘要  6-8  （二） 英文摘要  8-11二、正文  11-35  （一） 前言  11-12  （二） 材料与方法  12-21  （三） 结果  21-28  （四） 讨论  28-32  （五） 结论  32-33  （六） 参考文献  33-35三、综述  35-45  （一） 正文  35-41  （二） 参考文献  41-45四、附录  45-46五、附图  46-49六、致谢  49

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中图分类: > 医药、卫生 > 内科学 > 内分泌腺疾病及代谢病 > 胰岛疾病 > 糖尿病
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