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内质网应激对PC12稳转细胞株突变Htt586蓄积的影响

作　者: 吴泓
导　师: 秦正红；林芳；顾振纶
学　校: 苏州大学
专　业: 药理学
关键词: 亨廷顿舞蹈病亨廷顿蛋白内质网应激自噬/溶酶体泛素蛋白酶体
分类号: R363
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

目的:研究稳定表达亨廷顿蛋白(Huntingtin,Htt)氨基末端片段Htt-586片段的PC12细胞在衣霉素诱导的内质网应激的条件下,对Htt586片段的剪切与蓄积的影响。方法:采用慢病毒表达系统建立高分化PC12细胞稳定表达野生型与突变型Htt-586片段的亨廷顿舞蹈病的细胞模型,并用衣霉素处理制作内质网应激模型。运用MTT法检测衣霉素对细胞存活的影响,Western blot检测CHOP、HSP70、Caspase-12蛋白的表达作为ER应激的指标,检测LC3,p62水平指示ER应激条件下细胞自噬活性的改变,并检测ER应激条件下突变Huntingtin蛋白在细胞内的剪切与蓄积情况。结果:利用慢病毒表达系统,建立了稳定表达野生型与突变型Htt-586片段的PC12高分化细胞株;内质网应激诱导剂衣霉素(TM)在浓度为250 ng/ml下作用36 h能够显著激活稳转细胞的内质网应激效应,内质网应激指示蛋白CHOP、caspsase-12显著上升。同时,抗凋亡蛋白Bcl-2水平显著下降。细胞的自噬指标蛋白LC3-II水平明显增加,p62升高。Htt586片段尤其是突变Htt586蓄积明显增多。结论:成功建立衣霉素介导的稳定表达野生型与突变型Htt-586片段的PC12细胞株的内质网应激反应模型。研究表明,衣霉素显著诱导稳转细胞株的内质网应激,并进而引起Htt蛋白的蓄积。

全文目录

中文提要  4-5
Abstract  5-7
引言  7-11
  一、Htt 突变引起亨廷顿舞蹈病  7
  二、蛋白质错误折叠引起内质网应激  7-9
  三、自噬/溶酶体途径降解途径与亨廷顿舞蹈病  9-10
  四、本论文研究思路  10-11
第一章稳定表达Htt-586 的PC12 细胞的 ER 应激模型建立  11-22
  引言  11
  材料与方法  11-17
  结果  17-21
  小结  21-22
第二章 TM 对表达Htt586 稳转株细胞ER 应急的影响  22-27
  引言  22
  材料与方法  22-23
  结果  23-26
  小结  26-27
第三部分 ER 应激对表达Htt586 的稳转株的自噬活性及htt 蓄积水平的影响  27-31
  引言  27
  材料与方法  27
  结果  27-30
  小结  30-31
讨论  31-34
结论  34-35
参考文献  35-38
综述  38-47
  参考文献  44-47
攻读硕士学位期间发表文章  47-48
英文缩写词表  48-49
致谢  49-50

内质网应激对PC12稳转细胞株突变Htt586蓄积的影响

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