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毛细管电泳法对几种手性抗组胺药物的分析应用

作　者: 刘桂兰
导　师: 张建革
学　校: 郑州大学
专　业: 药物分析学
关键词: 毛细管电泳手性拆分抗组胺药物衍生化激光诱导荧光检测
分类号: R917
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要

毛细管电泳(capillary Electrophoresis,CE)又称之为高效毛细管电泳(HighPerformance capillary Electrophoresis,HPCE),是近年来发展较为迅速的一种分离分析技术,是20世纪80年代分析领域中最有影响的分支学科之一,是继高效液相色谱(HPLC)之后的又一重大进展。激光诱导荧光(LIF)检测器具有背景信号低,样品用量少等优势,是毛细管电泳(CE)中最灵敏的检测方法之一。毛细管电泳-激光诱导荧光法(CE-LIF)的应用范围广泛,包括环境、食品、临床分析、多肽和蛋白质分析等。本论文主要研究了以下两方面的内容:1.采用毛细管电泳法对几种抗组胺药物的手性拆分进行了研究,主要有扑尔敏、卡比沙明、二氧丙嗪、多西拉敏、奥索马嗪、盐酸羟嗪、西替利嗪。考察了影响拆分的几个因素:(1)手性选择剂种类对拆分的影响:考察了β-CD,γ-CD,CM-β-CD,HP-β-CD,Tri-OMe-β-CD,DM-β-CD这几种手性选择剂对抗组胺药物的拆分影响。结果表明CM-β-CD作为手性选择剂对五个抗组胺药物的手性分离效果较好。(2)手性选择剂浓度对拆分的影响:手性选择剂的浓度也是影响对映体分离的一个重要因素。本实验考察了浓度为5-15 mmol/L范围内的CM-β-CD对抗组胺类药物的手性拆分影响。实验结果表明,当CM-β-CD浓度在5-15 mmol/L范围内,随浓度增大,分离度逐渐增大,但是分离时间也逐渐变长,综合考虑分离度和分析时间的因素,确定CM-β-CD的最佳分离浓度为10 mmol/L。(3)运行缓冲液pH值对拆分的影响:考察了pH值分别为3.0,3.5,4.0,4.8,5.5,6.3的缓冲液对抗组胺类药物手性拆分影响。结果表明,本次实验扑尔敏和奥索马嗪的最佳pH值为3.5,卡比沙明、二氧丙嗪和多西拉敏的最佳pH值均为4.8。(4)电压对拆分的影响:考察了不同电压对拆分的影响。结果:电压对分离度和分析时间都有影响,综合考虑两方面的影响,确定分离电压分别为:扑尔敏20kV,卡比沙明20kV,奥索马嗪12kV,多西拉敏16kV,二氧丙嗪12kV。(5)柱温对拆分的影响:考察了柱温对拆分的影响。柱温不仅影响迁移时间,还影响环糊精与对映体之间的包结络合平衡。综合考虑,确定柱温分别是:扑尔敏25℃,卡比沙明25℃,奥索马嗪16℃,多西拉敏16℃,二氧丙嗪16℃。2.采用异硫氰酸荧光素(FITC)作为衍生化试剂,将盐酸索他洛尔进行衍生化,采用毛细管电泳-激光诱导荧光(CE-LIF)检测方法检测衍生化后的产物。分别考察了四种碱性溶液(50 mmol/L的硼砂溶液,0.01 mol/L的NaOH溶液,200 mmol/L的碳酸盐溶液,200 mmol/L的磷酸氢二钠)对衍生化反应的影响。实验结果证明,在硼砂溶液中的衍生化结果较好,干扰最少,检测信号最强,能够明显看到衍生化的的产物峰。但在其它三种缓冲液中的衍生化后产物有较多的干扰。此外还考察了2-24h内的衍生时间对衍生化反应的影响;考察了衍生温度以及毛细管电泳分离条件如分离缓冲液浓度,分离缓冲液pH值,温度和电压等因素,选择最优化的衍生化条件和分离条件。结果:本实验最佳条件是50 mmol/L的硼砂溶液作为衍生化溶液,反应时间12h,室温,暗处静置,电泳分离条件是25 mmol/L的硼砂溶液(pH值9.2)作为分离缓冲液,分离电压20 kV,柱温25℃,毛细管柱的有效长度37 cm。

全文目录

中文摘要  3-5
Abstract  5-8
目录  8-10
第一章毛细管电泳及应用研究进展(综述)  10-29
  1.1 引言  10-11
  1.2 毛细管电泳仪及其工作原理  11-13
  1.3 毛细管电泳的发展  13
    1.3.1 毛细管电泳技术的发展简史  13
    1.3.2 毛细管电泳仪器的发展  13
  1.4 毛细管电泳的常见分离模式  13-18
    1.4.1 毛细管区带电泳(CZE)  14
    1.4.2 胶束毛细管电动色谱(MEKC)  14-15
    1.4.3 毛细管电色谱(CEC)  15-16
    1.4.4 毛细管等速电泳(CITP)  16-17
    1.4.5 毛细管凝胶电泳(CGE)和毛细管等电聚焦(CIEF)  17
    1.4.6 非水毛细管电泳(NACE)  17-18
  1.5 毛细管电泳手性拆分研究  18-24
    1.5.1 手性化合物的分离原则  18
    1.5.2 影响对映体分离的因素  18-19
    1.5.3 手性拆分的策略  19-20
    1.5.4 常用手性选择剂  20-24
  参考文献  24-29
第二章毛细管电泳对几种抗组胺类药物的手性拆分研究  29-53
  2.1 引言  29-33
  2.2 实验部分  33-34
    2.2.1 仪器与试剂  33
    2.2.2 溶液的配制  33-34
    2.2.3 电泳条件  34
    2.2.4 计算  34
  2.3 结果与讨论  34-49
    2.3.1 环糊精种类对拆分的影响  34-38
    2.3.2 环糊精浓度对拆分的影响  38-39
    2.3.3 缓冲液pH对拆分的影响  39-42
    2.3.4 电压对拆分的影响  42-44
    2.3.5 柱温对拆分的影响  44-45
    2.3.6 运行缓冲液种类对拆分的影响  45-49
  2.4 小结  49-50
  参考文献  50-53
第三章 CE─LIF检测衍生化的盐酸索他洛尔  53-60
  3.1 引言  53-54
  3.2 实验部分  54-55
    3.2.1 仪器与试剂  54
    3.2.2 溶液的配制  54-55
    3.2.3 荧光衍生化反应  55
    3.2.4 电泳操作步骤  55
  3.3 结果与讨论  55-59
    3.3.1 衍生化条件的优化  55-57
    3.3.2 电泳分离条件的优化  57-59
  3.4 小结  59-60
参考文献  60-61
致谢  61

毛细管电泳法对几种手性抗组胺药物的分析应用

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