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猕猴桃雄性基因RAPD标记的研究

作　者: 姚春潮
导　师: 王跃进
学　校: 西北农林科技大学
专　业: 果树学
关键词: 猕猴桃 RAPD标记 性别连锁 克隆 测序
分类号: S663.4
类　型: 硕士论文
年　份: 2004年
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内容摘要


本研究以美味猕猴桃20个品种（株系）、中华猕猴桃15个品种（株系）及美味猕猴桃海瓦德×秦雄201人工控制杂交群体14个单株共计49份材料为试材,首先以亲本海瓦德和秦雄201的DNA为模板,对随机引物进行筛选,然后以F1代6个植株的DNA等量混合的雌性DNA样与雄性DNA样为模板,对引物进一步筛选,最后用杂交组合F1代个体DNA为模板,获得了与猕猴桃雄性基因连锁的RAPD标记S1032850和S79750,并对所得标记的有效性在中华猕猴桃和美味猕猴桃上进行了验证。同时对获得的与猕猴桃雄性基因连锁的RAPD标记S1032850进行了测序及序列相似性分析。取得的主要结果如下: 1.通过对300个随机引物的筛选和研究,得到了与猕猴桃雄性基因连锁的RAPD标记S1032850和S79750。在中华猕猴桃、美味猕猴桃雌雄个体上进一步验证发现:标记S1032850存在于研究所用的22株雄株中,在27株雌性个体中只有4株存在标记片段S1032850;标记S79750在22株雄株中有19株存在（在F1代6株雄株有5株存在）,在27株雌性个体中有13株存在标记片段S79750（在F1代6株雌株有1株存在）。表明猕猴桃雄性基因连锁的标记S1032850与实际符合率高于标记S79750。 2.从美味猕猴桃“秦雄201”亲本和中华猕猴桃“江西78-1”中分别回收了特异标记S1032850的DNA片段,对它们进行了克隆、测序,获得了S1032850标记的核苷酸序列,其由867 bp的特定碱基序列组成。将来自于中华猕猴桃雄性标记S1032850的特定碱基序列片段登陆Genbank,其登陆号为AY336259。为进一步将RAPD标记转化为SCAR标记和利用特定碱基序列及基因连锁图谱克隆雄性基因奠定基础。 3.利用BLAST工具对美味猕猴桃和中华猕猴桃特异标记S1032850的DNA片段碱基序列进行了相似性分析,两序列的相似性达97%。在CBI库中,利用BLAST工具对美味猕猴桃特异标记S1032850的DNA序列相似性分析发现,该序列与其它生物体DNA序列同源性较小,为猕猴桃基因组所特有。

全文目录


致谢  6-9
摘要  9-10
Abstract  10-11
第一章 文献综述  11-25
  §1 高等植物性别分化及其研究进展  11-17
    §1.1 高等植物性别研究的意义  11
    §1.2 高等植物性别表现的类型和特点  11-12
    §1.3 高等植物性别分化的遗传学基础  12-14
    §1.4 高等植物性别分化的影响因子  14-17
  §2 雌雄异株植株性别鉴定的研究进展  17-22
    §2.1 形态学鉴定  17
    §2.2 同工酶鉴定  17-18
    §2.3 酚类、鞣质鉴别法  18-19
    §2.4 氧化还原鉴别法  19
    §2.5 蛋白质、氨基酸等含量鉴别法  19
    §2.6 化学药剂处理鉴别法  19
    §2.7 染色体组型鉴别法  19-20
    §2.8 特异大分子标记鉴别法  20-22
  §3 猕猴桃性别变异及其可能的遗传基础  22-23
  §4 RAPD技术的基本原理及其在果树上的应用  23
    §4.1 RAPD技术的基本原理  23
    §4.2 RAPD技术在果树上的应用  23
  §5 本研究的目的和意义  23-25
实验部分  25-47
  第二章 材料与方法  25-31
    §1 材料  25
    §2 方法  25-31
      §2.1 猕猴桃基因组DNA提取  25-26
      §2.2 DNA浓度及纯度的测定  26
      §2.3 RAPD扩增体系  26
      §2.4 猕猴桃雄性基因RAPD标记的克隆及序列测定  26-30
      §2.5 猕猴桃雄性基因特异标记DNA片段的序列分析  30-31
  第三章 结果与分析  31-43
    §1 猕猴桃基因组DNA的提取结果  31
    §2 猕猴桃雄性基因的RAPD标记  31-34
      §2.1 特异引物的筛选  31-32
      §2.2 雄性基因RAPD标记在杂交F_1代及中华猕猴桃、美味猕猴桃雌雄个体上的验证  32-34
    §3 猕猴桃雄性基因标记DAN片段的回收、克隆与测序  34-36
      §3.1 DAN片段的回收、克隆及重组质粒的酶切与鉴定  34-35
      §3.2 猕猴桃雄性基因标记DNA片段的测序结果  35-36
    §4 猕猴桃雄性基因特异标记DNA片段序列分析  36-43
      §4.1 美味猕猴桃与中华猕猴桃雄性基因特异标记DNA片段的相似性分析  36-38
      §4.2 猕猴桃雄性特异标记DNA序列的生物信息分析  38-43
  第四章 讨论  43-46
    §1 关于猕猴桃性别表现的类型及性别分化的遗传学基础  43-44
    §2 关于猕猴桃雄性基因RAPD标记S1032_(850)和S79_(750)的获得及其与猕猴桃性别控制基因的关系  44
    §3 关于特异标记DNA序列的分析  44-45
    §4 关于猕猴桃雄性基因RAPD标记的应用  45-46
  第五章 结论  46-47
参考文献  47-56
作者简介  56

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中图分类: > 农业科学 > 园艺 > 果树园艺 > 浆果类 > 猕猴桃
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