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胆固醇对人内皮细胞DNA的损伤及绞股蓝总苷的保护作用

作　者: 汪慧星
导　师: 钱民章
学　校: 遵义医学院
专　业: 生物化学与分子生物学
关键词: 绞股蓝总苷 DNA损伤胆固醇 γH2AX 活性氧
分类号: R285.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

目的：研究胆固醇对人内皮细胞DNA的损伤及绞股蓝总苷的保护作用。方法：1.培养并鉴定人脐静脉内皮细胞株(CRL-1730)。2.三种方法检测γH2AX：用12.5mg/L,25mg/L,50mg/L胆固醇作用于人脐静脉内皮细胞12小时,免疫荧光法观察细胞中γH2AX形成的焦点；Western blot及流式细胞术检测细胞内γH2AX表达量变化。3.先用NAC(10mM)或1μg/mL,10μg/mL,100μg/mL绞股蓝总苷预作用细胞1小时,再用50mg/L胆固醇作用细胞12小时,免疫荧光法观察细胞中γH2AX形成的焦点,Western blot检测细胞内γH2AX表达量变化；流式细胞术检测细胞内活性氧的变化。结果：1.成功培养了人脐静脉血管内皮细胞株(CRL-1730),经免疫荧光鉴定为内皮细胞。2.不同浓度的胆固醇作用人脐静脉内皮细胞12小时后,免疫荧光结果显示不同浓度的胆固醇均可诱导细胞内γH2AX形成焦点,随着胆固醇浓度的增加,γH2AX形成焦点的荧光强度也逐渐增强；Western blot结果及流式细胞术结果表明,胆固醇作用后细胞内γH2AX表达量随胆固醇浓度增大而增强。3.用NAC或绞股蓝总苷预作用细胞后,免疫荧光结果显示随着绞股蓝总苷的浓度的增大,细胞内的γH2AX形成的焦点荧光强度逐渐减弱,与50mg/L胆固醇作用组比较,差异具有统计学意义；Western blot结果结果表明,细胞内γH2AX表达量随绞股蓝总苷浓度增大而减弱,与50mg/L胆固醇作用组比较,差异具有统计学意义；流式细胞术结果显示细胞内活性氧水平均明显降低,且随着绞股蓝总苷的浓度的增大,细胞内的活性氧水平逐渐降低,与50mg/L胆固醇作用组比较,差异具有统计学意义。结论：1、胆固醇通过升高人脐静脉内皮细胞中ROS水平,导致DNA损伤。2、GPs通过降低细胞内ROS水平减轻胆固醇所致的细胞DNA损伤。

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英汉缩略词对照表  4-6
中文摘要  6-7
Abstract  7-8
前言  8-11
材料与方法  11-22
结果  22-38
讨论  38-40
结论  40-41
参考文献  41-43
综述:氧化应激与DNA损伤  43-51
  参考文献  47-51
致谢  51-52
作者简介  52

胆固醇对人内皮细胞DNA的损伤及绞股蓝总苷的保护作用

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