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壁虎醇提物抗肿瘤作用研究

作　者: 宋佳玉
导　师: 王建刚
学　校: 河南科技大学
专　业: 药理学
关键词: 壁虎醇提物 肾包膜移植 血管内皮生长因子 食管癌EC-109细胞 细胞凋亡
分类号: R285.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要


目的:观察壁虎醇提物对小鼠肾包膜下移植S180肉瘤和人食管癌EC-109细胞增值的抑制作用,并探讨作用机制。方法:建立小鼠肾包膜下移植S180肉瘤模型,将40只雄性昆明小鼠随机分为模型对照组(生理盐水)、环磷酰胺组(0.1 g/kg)、壁虎醇提物高剂量组(2.4 g/kg)、壁虎醇提物低剂量组(1.2 g/kg)共4组。腹腔注射给药6天后,测量荷瘤小鼠体重,评价药物对小鼠的毒性反应;测量小鼠肉瘤体积,称取移植瘤小鼠胸腺重、脾脏重,计算抑瘤率、胸腺指数、脾脏指数;用SP免疫组化法检测血管内皮生长因子(VEGF)的表达。应用MTT法测定壁虎醇提物对食管癌EC-109细胞增值的抑制情况;倒置显微镜下观察壁虎醇提物对食管癌EC-109细胞形态的影响;Hoechst 33342染色荧光显微镜下观察食管癌EC-109细胞核形态学变化;流式细胞术检测细胞凋亡率;SP免疫组化检测Fas蛋白和Caspase-3蛋白的表达情况。结果:体内实验结果显示,壁虎醇提物可抑制小鼠S180肉瘤的生长,环磷酰胺组、壁虎醇提物高剂量组、壁虎醇提物低剂量组抑瘤率分别为74.5%、77.5%、57.5%,且各组终末体重/初始体重的比率分别为0.94、1.03、0.99;组织免疫组化显示壁虎醇提物组与模型对照组比较VEGF蛋白的表达明显减少。体外抑瘤实验结果显示,壁虎醇提物可以抑制食管癌EC-109细胞的增值,2.5,3.0,3.5,4.0,4.3,4.6 mg/mL壁虎醇提物组48 h抑瘤率分别3.3%,14.3%,16.5%,25.7%,62.4%,77.9%,72 h抑瘤率分别为25.5%,30.1%,32.6%,46.8%,84.9%,96.9%;壁虎醇提物作用组细胞体积变小,变圆,分泌颗粒增多,细胞内出现空泡现象,并且随着时间和浓度的增大,大部分细胞脱壁;壁虎醇提物作用于食管癌EC-109细胞48 h后,出现明显的细胞凋亡特征(DNA浓缩、致密,表现为高亮度荧光);流式细胞术显示4.0 mg/mL壁虎醇提物作用48 h时细胞凋亡率为19.43%;细胞免疫组化检测显示,与正常对照组相比壁虎醇提物组Fas蛋白和Caspase-3蛋白的表达显著增加。结论:壁虎醇提物在体内和体外均有抗肿瘤活性,其抗肿瘤作用可能是通过增加Fas蛋白和Caspase-3蛋白的表达,诱导细胞凋亡,抑制肿瘤血管的生成而实现的。

全文目录


摘要  2-4
ABSTRACT  4-8
第1章 综述  8-12
  1.1 化学成分分析  8
  1.2 抗肿瘤的临床研究  8-9
  1.3 抗肿瘤的实验研究  9-11
  1.4 小结  11-12
第2章 引言  12-13
第3章 材料与方法  13-21
  3.1 实验材料  13-16
    3.1.1 壁虎醇提物的制备  13
    3.1.2 实验细胞、动物及瘤株  13
    3.1.3 主要试剂  13-14
    3.1.4 主要仪器  14
    3.1.5 主要试剂的配置  14-16
  3.2 实验方法  16-21
    3.2.1 壁虎醇提物中蛋白含量双缩尿法常规测定  16
    3.2.2 肾包膜下移植S180 肉瘤模型建立  16
    3.2.3 急性毒性试验  16
    3.2.4 体内实验  16-18
    3.2.5 体外实验  18-20
    3.2.6 统计学方法  20-21
第4章 结果  21-28
  4.1 双缩尿实验  21
  4.2 急性毒性试验结果  21
  4.3 体内实验结果  21-25
    4.3.1 壁虎醇提物对荷瘤小鼠5180 移植瘤的抑制作用  21-22
    4.3.2 壁虎醇提物对荷瘤小鼠免疫功能影响  22-23
    4.3.3 小鼠5180 肉瘤组织病理学变化  23
    4.3.4 壁虎醇提物对5180 肉瘤组织VEGF 蛋白表达的影响  23-25
  4.4 体外实验结果  25-28
    4.4.1 光镜形态学观察  25
    4.4.2 壁虎醇提物对食管癌EC-109 细胞的增值抑制作用  25-26
    4.4.3 Hoechst 33342 荧光染色  26
    4.4.4 流式细胞术检测凋亡率  26-27
    4.4.5 SP 免疫组化检测Fas 蛋白和Caspase-3 蛋白的表达  27-28
第5章 讨论  28-33
  5.1 抗肿瘤作用及机制  28-32
    5.1.1 壁虎醇提物抗肿瘤作用  28-29
    5.1.2 壁虎醇提物抗肿瘤机制  29-32
  5.2 进一步工作  32-33
第6章 结论  33-34
参考文献  34-40
缩略语词汇表  40-41
附图  41-46
致谢  46-47
攻读硕士学位期间的研究成果  47

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中图分类: > 医药、卫生 > 中国医学 > 中药学 > 中药药理学 > 中药实验药理
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