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成人骨髓间充质干细胞体外培养及神经元样细胞定向诱导分化的研究

作　者: 王海峰
导　师: 赵勇刚
学　校: 河南科技大学
专　业: 肿瘤学
关键词: 成人骨髓间充质干细胞体外培养诱导分化恶性转化
分类号: R329
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
下　载: 22次
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内容摘要

目的:研究成人骨髓间充质干细胞(hMSC)的生物特性和发生,发育的规律,探讨其在临床应用,体外扩增的过程中的安全性,以及在临床应用的过程中是否会发生恶性转化。方法:我们研究了体外培养的hMSC,在不同的培养时间点,发生恶性转化的敏感性。穿刺抽取10名健康志愿者的骨髓,分离提取得到hMSC,体外培养至衰老或需要传代(P) 25,8周至12周(hMSC的衰老期),干预终止之前,密切观察监视hMSC的变化。通过阵列比较基因组杂交,常规核型分析和端粒荧光原位杂交,研究分析长期培养之前和之后干细胞的遗传特性。检测分析不同传代次数和阶段,hMSC端粒酶的表达活性,端粒酶逆转录酶(hTERT)的转录物,和端粒延长的具体机制。结果:不同的志愿者之间,hMSC的增殖能力,和寿命有着巨大的变化。其中八个志愿者,hMSC增殖能力在衰老之前逐渐减弱。余下的两个志愿者,为了进行数据分析在P25阶段,hMSC的培养被打断。阵列比较基因组杂交阵列全息图和细胞遗传学分析显示,干细胞在体外培养扩增没有出现染色体异常;端粒酶活性未变,hTERT没有转录表达,端粒在培养阶段被缩短。端粒的延长机制没有发现和证实。结论:骨髓来源的干细胞可以在体外安全地扩增,不易发生恶性转化,从而使hMSC的更加适合于干细胞疗法的临床应用。

全文目录

摘要  2-3
ABSTRACT  3-7
第1章综述  7-17
  1.1 中枢神经系统疾病的HMSC 治疗  7-13
    1.1.1 脑肿瘤的 hMSC 治疗  8
    1.1.2 创伤性颅脑损伤疾病的hMSC 治疗  8-9
    1.1.3 脑血管疾病的MSC 治疗  9-10
    1.1.4 Parkinson’s Disease  10-11
    1.1.5 Alzheimer’s Diseaze  11
    1.1.6 Huntington’s Disease  11-12
    1.1.7 多发性硬化症  12-13
  1.2 干细胞治疗的途径和方法  13
  1.3 hMSC 治疗的潜在作用机制  13
  1.4 关于干细胞治疗的思考  13-14
  1.5 临床研究现状  14-17
第2章前言  17-19
第3章材料和方法  19-25
  3.1 材料  19
  3.2 主要试剂与仪器  19-20
    3.2.1 主要实验材料、试剂、试剂盒  19
    3.2.2 主要实验设备器材  19-20
  3.3 标本的处理方法与检测手段  20-25
    3.3.1 分离和长期培养骨髓源性干细胞hMSC  20-21
    3.3.2 流式细胞仪检测  21
    3.3.3 hMSC 的多向分化潜能  21-22
    3.3.4 RNA 提取和逆转录聚合酶链反应分析端粒酶逆转录酶  22
    3.3.5 检测与早幼粒细胞白血病小体有关的端粒延长替代机制  22
    3.3.6 端粒长度分析  22-23
    3.3.7 分子核型分析  23
    3.3.8 细胞遗传学分析（染色体和端粒FISH 技术）  23-25
第4章结果  25-29
  4.1 长期体外培养的人骨髓源性干细胞的生物学特征  25-26
  4.2 人骨髓源性干细胞在长期的体外培养中缺乏端粒维持的机制的表达与p53 基因分析  26-27
  4.3 染色体核型分析和端粒FISH 分析  27-29
第5章讨论  29-31
第6章结论  31-33
参考文献  33-42
附录图片  42-48
致谢  48-49
攻读硕士学位期间的研究成果  49

成人骨髓间充质干细胞体外培养及神经元样细胞定向诱导分化的研究

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