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LIF和bFGF对维持绵羊类胚胎干细胞自我更新和多潜能性候选基因的影响

作　者: 陈博
导　师: 黄俊成；石庆华
学　校: 新疆农业大学
专　业: 生物化学与分子生物学
关键词: 绵羊类胚胎干细胞体外培养白血病抑制因子碱性成纤维细胞因子
分类号: S826
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

胚胎干细胞(Embryonic stem cell, ESC)的应用已经在医学、基础研究领域和商业化市场被认可,这些都归因于ESC多潜能性和自我更新的特点。本实验结合国际ESC最新研究进展,在本实验室前期对绵羊类胚胎干细胞(Ovine embryonic stem-like cell, oESC-like)建系的基础上,对不同发育阶段的绵羊囊胚建系,并且在后期培养过程中分别添加白血病抑制因子(Leukemia inhibitory factor, LIF)和碱性成纤维细胞生长因了(Basic fibroblast growth factor, bFGF)观察这2种细胞因子对oESC-like增殖,凋亡以及多能性候选基因表达量的影响。本实验主要研究结果如下：利用相同分离方法对绵羊体外培养所得的不同发育阶段囊胚(早期囊胚、扩张囊胚、孵化囊胚)进行分离,所获得原代oESC-like率分别为：早期囊胚19.6%(3/12)、扩张囊胚37.5%(27/72)、孵化囊胚25%(3/12)(P<0.01)。并且碱性磷酸酶检测结果都呈阳性。在oESC-like培养过程中分别添加LIF和bFGF细胞因子,通过检测生长5天oESC-like的增殖和凋亡发现,bFGF组的oESC-like增殖速度与其他三个实验组差异极显著(P<0.01),而人源LIF (Human leukemia inhibitory factor, hLIF)、小鼠LIF (Mouse leukemia inhibitory factor, mLIF)和对照组(N2B27)的oESC-like增殖差异不显著(P>0.05)；在凋亡检测方面LIF和bFGF差异不显著(P>0.05)。利用Real-time PCR技术对其多能性基因检测发现,LIF对oESC-like多能性候选基因SOX2表达有上调作用(P<0.01),而OCT4的表达显著降低(P<0.01),并且mLIF与hLIF这两种不同种属的细胞因子对oESC-like多能性候选基因的调节无差异(P>0.05)；但是bFGF使oESC-like多能性候选基因SOX2和OCT4的表达量上调(P<0.01)。

全文目录

摘要  4-5
Abstract  5-8
第1章引言  8-24
  1.1 研究目的与意义  8-9
  1.2 LIF因子的研究进展  9-13
  1.3 bFGF因子及研究进展  13-16
  1.4 多潜能性候选基因的研究进展  16-23
  1.5 研究内容与试验思路  23-24
第2章绵羊类胚胎干细胞的分离培养  24-34
  2.1 实验材料与设备  24-28
  2.2 实验方法  28-29
  2.3 实验结果  29-32
  2.4 讨论  32-34
第3章细胞因子LIF和bFGF对绵羊类胚胎干细胞自我更新及多潜能性候选基因的影响  34-56
  3.1 实验材料与设备  34-35
  3.2 实验方法  35-42
  3.3 实验结果  42-53
  3.4 讨论  53-56
第4章结论  56-57
参考文献  57-67
致谢  67-68
作者简介  68

LIF和bFGF对维持绵羊类胚胎干细胞自我更新和多潜能性候选基因的影响

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