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血浆DNA定量检测在鉴别诊断各种肝病中的临床应用价值

作　者: 陈进步
导　师: 潘世扬
学　校: 南京医科大学
专　业: 临床检验诊断学
关键词: 血浆DNA 原发性肝细胞肝癌重症肝炎实时荧光定量PCR ALT AFP
分类号: R512.62
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要

背景乙型肝炎病毒(HBV)感染是一个主要的人类健康问题。HBV是导致重症肝炎、急慢性肝炎、肝硬化以及原发性肝细胞肝癌(HCC)的主要原因。尤其在中国这样一个HBV感染的肝病大国,据报道HBV所致肝癌每年死亡数为384 000人。特别是重症肝炎,死亡率高达80%。因此,对各种乙型肝炎(乙肝)的鉴别和监测以及肝纤维化及早期HCC的诊断具有重要的临床意义。肝细胞损伤是乙肝患者的普遍现象,各种类型的乙肝患者其肝细胞损伤程度不同。用实验室指标(如ALT、HBV DNA和胆红素等)来评估肝细胞损伤程度到目前为止还没有统一定论。甲胎蛋白(AFP)虽然是鉴别诊断HCC的一个非常有价值的指标,但仍存在一定的假阳性和假阴性。血浆DNA是一种无细胞状态的血浆游离DNA。其水平升高不仅存在于恶性肿瘤中,而且还与感染、创伤和炎症等密切相关。由于在肿瘤、感染或炎症条件下不同类型肝病的肝细胞损伤轻重不同,从肝细胞中释放的循环DNA量也不同。可以通过循环DNA水平来评估乙肝患者肝细胞损伤程度以及鉴别HCC。到目前为止,研究者报道的多是血浆DNA和HCV感染有关的HCC的文章,关于血浆DNA水平与各种乙肝以及HBV所致HCC之间关系的系统性研究未见文献报道。目的用本实验室自行设计的双重荧光定量PCR方法对各种类型肝病患者的血浆DNA进行定量检测,同时采用现有实验室评估指标分别评估各组不同类型乙肝患者肝细胞损伤程度,并对血浆DNA和现有实验指标的肝细胞损伤程度评估能力进行比较。进而评价其在鉴别诊断各种肝病中的临床应用价值。方法对30例重症肝炎,20例急性肝炎,90例慢性乙肝和45例肝硬化以及200例健康体检者的血浆DNA进行磁珠法提取,双重荧光定量PCR方法检测,来评估重症肝炎患者肝细胞损伤程度。对59例HCC,56例慢性乙肝和37例肝硬化以及200例健康体检者血浆DNA进行磁珠法提取,双重荧光定量PCR方法检测,来评价其在HCC鉴别诊断中的临床应用价值。结果1,重症肝炎和其他乙肝比较乙肝患者的血浆DNA和ALT中位水平都显著高于健康对照。血浆DNA水平在重症肝炎与急性肝炎、慢性乙肝和肝硬化之间都具有显著差异(P = 0.0018、0.0000和0.0000)。重症肝炎的ALT水平与急性肝炎之间有显著差异(P = 0.0024),与慢性乙肝和肝硬化之间没有显著差异(P = 0.0600和P =1.0000)。ROC曲线分析显示,在鉴别重症肝炎和肝硬化以及慢性乙肝时,血浆DNA的鉴别能力显著优于ALT (AUC,0.95 vs 0.51, P = 0.0000;0.86 vs 0.34,P = 0.0000)。重症肝炎患者的胆红素中位水平(195.5μmol/ L)最高。四组乙肝患者的HBV DNA中位水平也显著升高(1.1×10~6拷贝/ml),但它们两两之间并没有统计学差异(P = 0.7378)。通过相关分析,血浆DNA水平与乙肝患者肝细胞损伤程度呈显著正相关(r = 0.62),而ALT与之相关性较小(r = 0.11)。血浆DNA与ALT之间相关性较小(r = 0.27)。2,HCC和其他乙肝比较肝病患者的血浆DNA和AFP中位水平都显著高于健康对照。血浆DNA在HCC、慢性乙肝和肝硬化患者的中位水平分别为260.2 (96.9~435.6) ng/ml、90.6 (60.7~134.2) ng/ml和74.8 (44.1~127.3) ng/ml。HCC患者血浆DNA水平与慢性乙肝和肝硬化患者之间有显著差异(P = 0.0000和P = 0.0000)。HCC患者AFP水平与慢性乙肝和肝硬化患者之间也有显著性差异(P = 0.0033和0.0033)。血浆DNA中位水平在HBsAg阳性和HBsAg阴性的HCC患者之间有显著性差异(310.9 vs 106.7 ng/ml,P = 0.0290),而AFP水平在两者间无差异(P = 0.2090)。在鉴别HBsAg阳性的HCC和肝硬化以及慢性乙肝时,血浆DNA的鉴别能力都优于AFP (AUC,0.82 vs 0.72;0.77 vs 0.70)。血浆DNA与AFP之间相关性较小(r = 0.37)。结论本研究首次采用带有内参照的双重荧光定量PCR技术对各种肝病患者的血浆DNA水平进行检测分析。研究结果表明,血浆DNA是一个用于准确评估重症肝炎患者肝细胞损伤程度的有价值的辅助指标,同时它在HCC患者鉴别诊断中具有重要的临床应用价值。可能联合其它实验室指标,诊断更为准确。

全文目录

中文摘要  5-8
英文摘要  8-12
英文缩略词表  12-13
前言  13-15
正文  15-40
  第一部分血浆DNA 定量检测用于重症肝炎患者肝细胞损伤的评估  15-29
    1 背景  15
    2 对象与方法  15-20
      2.1 研究对象  15-16
      2.2 试剂与仪器  16-17
      2.3 样本采集与处理  17
      2.4 磁珠法提取血浆DNA  17-18
      2.5 双重荧光定量PCR 检测血浆DNA 水平  18-19
      2.6 血清ALT、胆红素检测  19
      2.7 HBV DNA 检测  19
      2.8 统计学分析  19-20
    3 结果  20-25
      3.1 血浆DNA 水平和临床特性  20-21
      3.2 重症肝炎和其他三种乙肝患者的血浆DNA 水平  21
      3.3 重症肝炎和其他三种乙肝患者的血清ALT 水平  21-23
      3.4 血浆DNA 和血清 ALT 在重症肝炎和其他三种肝炎上的鉴别效能  23-25
      3.5 血浆DNA、ALT 与乙型肝炎患者肝细胞损伤程度之间的相关性分析  25
    4 讨论  25-29
  第二部分血浆DNA 定量检测在HCC 诊断中的应用价值  29-40
    1 背景  29
    2 对象与方法  29-31
      2.1 研究对象  29-30
      2.2 试剂与仪器  30
      2.3 样本采集与处理  30
      2.4 磁珠法提取血浆DNA  30
      2.5 双重荧光定量PCR 检测血浆DNA 水平  30
      2.6 血清AFP、乙肝二对半检测  30
      2.7 HBV DNA 水平检测  30
      2.8 统计学分析  30-31
    3 结果  31-37
      3.1 血浆DNA 水平和临床特性  31
      3.2 HCC 和其他两种乙肝患者的血浆DNA 水平  31-33
      3.3 HCC 和其他两种乙肝患者的血清AFP 水平  33
      3.4 表抗阳性和表抗阴性的HCC 患者血浆DNA 和血清AFP 的水平比较  33-35
      3.5 血浆 DNA 和血清 AFP 在 HCC 和其他两种肝炎上的鉴别效能  35-37
    4 讨论  37-40
小结  40-41
参考文献  41-47
综述  47-61
  参考文献  55-61
攻读学位期间发表文章情况  61-62
致谢  62

血浆DNA定量检测在鉴别诊断各种肝病中的临床应用价值

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