学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示
叶酸—白蛋白—多柔比星的制备及其抗肿瘤性质研究
作 者: 瞿小兰
导 师: 项光亚
学 校: 华中科技大学
专 业: 药物化学
关键词: 叶酸受体 偶联 白蛋白 多柔比星 细胞摄取 细胞凋亡
分类号: R944
类 型: 硕士论文
年 份: 2009年
下 载: 171次
引 用: 0次
阅 读: 论文下载
内容摘要
在临床上对于癌症的治疗,药物的传统给药方式已经显得比较低效,另外,化疗因难以忍受的各种不良反应使得其临床应用率大大受到限制,因此,抗肿瘤药物特定传送已经逐渐成为一个吸引人的癌症治疗方法。寻找有效的药物靶向投递系统,是肿瘤生物治疗的研究热点之一。叶酸受体介导的药物投递系统利用叶酸受体在一些肿瘤组织高水平表达叶酸受体,在正常组织中不表达或低表达,通过叶酸受体介导的内吞作用将所携带的药物靶向转运到特定的组织和细胞,具有高特异性、高亲和力的特点,大大提高了药物转运效率。目前,肿瘤细胞叶酸受体受到广泛关注,已成为肿瘤诊断和治疗研究的新靶点。肿瘤细胞表面的叶酸受体及叶酸受体介导的叶酸高分子复合物的肿瘤靶向性是本研究的主题。本论文设计了一种叶酸-牛血清白蛋白-多柔比星(即Folate-BSA-DOX)三元靶向给药体系,其中,由于叶酸和多柔比星能同时结合于牛血清白蛋白的不同位点而被牛血清白蛋白运输到体内,再利用叶酸与其受体的特异性结合而使肿瘤细胞更有效地摄取多柔比星。紫外吸收光谱证实了Folate-BSA-DOX三元体系的形成。而且,细胞凋亡试验显示偶联了叶酸的Folate-BSA-DOX三元体系的48小时细胞调亡率达到38.8%,比未偶联叶酸的BSA-DOX二元体系高出70%。本研究证明:叶酸-牛血清白蛋白-多柔比星三元靶向给药体系是可行的也是有效的。本研究的主要内容包括:利用经典的过碘酸钠氧化反应,把多柔比星上的羟基氧化成醛基,白蛋白上的游离功能氨基通过许夫碱结合到多柔比星的醛基上,合成了BSA-DOX .通过紫外扫描图可以清楚地证明BSA-DOX成功地合成,叶酸受体在多种肿瘤细胞表面高表达的特点,使其具有主动靶向作用,以期望提高BSA-DOX对肿瘤细胞摄取量。利用双功能偶联剂1-(3-二甲基-氨丙基)-3-乙基碳二亚胺(EDC)将叶酸通过叶酸活性酯的方式与BSA-DOX偶联。通过葡聚糖凝胶柱色谱法可以清楚地看到叶酸-白蛋白-多柔比星与未反应的叶酸活性酯完全分离,同时用紫外进行监测洗脱,纯化的叶酸-白蛋白-多柔比星与叶酸、白蛋白、多柔比星机械混合的洗脱曲线说明叶酸己经成功地偶联于BSA-DOX上。对反应时间、pH和叶酸活性酯用量等因素进行了单因素考察,确定了最佳的偶联工艺,反应时间为1小时、pH为9.8和叶酸活性酯用量在30mg时偶联比较高。并且定量测定了偶联物中叶酸、多柔比星对BSA的偶联率。以叶酸受体阳性的人宫颈癌细胞Hela为模型细胞,通过倒置荧光显微镜定性观察,研究了Hela细胞对叶酸-白蛋白-多柔比星的特异性摄取作用,并从给药浓度、给药时间和偶联比不同三个方面考察了叶酸-白蛋白-多柔比星对其摄取作用的影响,在细胞摄取的影响因素实验中发现,随着培养时间的延长、给药浓度的增大,Hela细胞中的荧光强度增强了。运用流式细胞术(FCM)定量检测叶酸受体阳性细胞对叶酸-白蛋白-多柔比星的摄取作用,进一步证明了偶联了叶酸的聚合物对叶酸受体阳性细胞的靶向作用。同时通过流式细胞术检测了叶酸-白蛋白-多柔比星诱导Hela细胞的细胞凋亡率。分别给药12、24、48小时,偶联了叶酸与未偶联叶酸的聚合物对Hela细胞的细胞凋亡率有明显区别。总之,本研究制备的大分子靶向药物叶酸-白蛋白-多柔比星具有靶向叶酸受体阳性细胞的特异性和药物的诱导细胞凋亡的特性。
|
全文目录
摘要 6-8 Abstract 8-10 前言 10-13 第一章 BSA-DOX 的制备和分离纯化 13-21 引言 13-14 1. 仪器与试剂 14 2. 实验方法 14-17 3. 结果与分析 17-20 4 结论 20-21 第二章 叶酸-BSA-DOX 的制备与分离 21-31 引言 21 1. 仪器与试剂 21-22 2. 实验方法 22-25 3. 结果与分析 25-29 4 结论 29-31 第三章 叶酸-BSA-DOX 的体外细胞摄取研究 31-48 引言 31-32 第一节 叶酸受体阳性细胞对叶酸-BSA-DOX 的特异性摄取 32-40 1. 仪器与试剂 32-33 2. 实验方法 33-35 3. 结果与分析 35-40 第二节 定量检测叶酸受体阳性细胞对叶酸-BSA-DOX 的摄取量 40-43 1. 仪器与试剂 40-41 2. 实验方法 41 3. 结果与分析 41-43 第三节 叶酸-BSA-DOX 诱导叶酸受体阳性细胞的细胞凋亡率 43-48 1. 仪器与试剂 43 2. 实验方法 43-45 3. 结果与分析 45-46 4. 结论 46-48 全文总结 48-51 参考文献 51-55 综述 55-69 参考文献 65-69 致谢 69-70 附录 70
|
相似论文
- 西施舌精子冷冻保存及其冷冻损伤机理研究,S968.3
- CADPE抗肿瘤作用及对胃癌细胞凋亡的影响,R735.2
- 一个油菜菌核病抗病相关基因的功能初步分析,S435.654
- 醋酸铅对鲤鱼卵巢上皮细胞毒性的研究,X174
- 地克珠利对柔嫩艾美耳球虫第二代裂殖子甘油醛-3-磷酸脱氢酶的影响,S858.31
- PCV2对体外培养仔猪淋巴细胞钙信号的影响及其机理初探,S858.28
- β-catenin在猪卵巢组织中的表达以及对猪卵巢颗粒细胞凋亡及类固醇生成酶的影响,S828
- 伏马菌素B1和黄曲霉毒素B1联合诱导Vero细胞凋亡的研究,S856.9
- 黄曲霉毒素B1和脱氧雪腐镰刀菌烯醇诱导锦鲤原代肝细胞凋亡机制的初步研究,S856.9
- 沉默BMPR-IB基因对猪卵巢颗粒细胞凋亡及BMP通路相关基因表达的影响,S828
- 脱氧雪腐镰刀菌烯醇对鸡软骨细胞增殖、分化及凋亡的影响,S858.31
- Foxol对小鼠颗粒细胞凋亡的影响,S865.13
- 线粒体温和解偶联剂的发现及作用机制研究,R341
- 骨髓间充质干细胞预移植1周对大鼠心肌缺血再灌损伤的修复作用,R542.22
- 微量白蛋白尿与高血压病患者心血管事件的相关性研究,R544.1
- 树突状细胞在多柔比星诱导的大鼠肾纤维化模型中的作用,R692.5
- 18氟—氟代脱氧葡萄糖诱导Eca-109食管癌细胞凋亡的初步研究,R735.1
- 脱氧雪腐镰刀菌烯醇诱导仓鼠肾细胞凋亡信号转导机制的研究,S856.9
- 小剂量螺内酯对2型糖尿病患者糖尿病肾病的抗氧化保护作用探讨,R587.2
- 脱氧雪腐镰刀菌烯醇诱导人结肠癌细胞凋亡线粒体信号转导机制的研究,R735.35
- 磷脂酶C和D在木聚糖酶诱导的水稻悬浮细胞抗病反应中的作用,S511
中图分类: > 医药、卫生 > 药学 > 药剂学 > 剂型
© 2012 www.xueweilunwen.com
|