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大叶蒟抗抑郁有效部位制备工艺、质量标准研究及大叶蒟挥发油化学成分研究

作　者: 董栋
导　师: 潘胜利
学　校: 复旦大学
专　业: 生药学
关键词: 胡椒属大叶蒟抗抑郁制备工艺含量测定挥发油 GC-MS
分类号: R284
类　型: 硕士论文
年　份: 2008年
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内容摘要

本课题组从我国25种胡椒属植物中筛选出大叶蒟（Piper laetispicum C.DC.）作为目标植物,展开天然抗抑郁药物的研究。大叶蒟（P.laetispicum C.DC.）为胡椒科胡椒属植物,主要分布于我国的广东、广西、云南和海南等省,民间异名小肠风、山胡椒、野胡椒,主要用于活血、消肿、止痛。通过对其药理作用和有效成分的研究,确定该植物乙醇提取物的乙酸乙酯萃取部位的抗抑郁活性最强,laetispicine为主要活性化合物。本文的选题以开发中药五类新药（天然药物中提取的有效部位）为目标,按照该课题要求并参照国家药品监督局颁布的《新药审批办法》,从新药的制备工艺、质量标准两方面进行研究,以大叶蒟提取物中的有效部位群“酰胺类化合物”作为研究对象,建立了该类化合物含量测定方法和最佳提取与纯化方法,并为此进行了有效部位化学成分的分离。为大叶蒟抗抑郁新药的开发打下良好的基础。在对大叶蒟药理活性和化学成分进行研究时,发现其乙醇提取物中存在大量油性成分。近年来,国内外对胡椒属植物挥发油的杀虫、抗菌、抗氧化等活性也多有报道。本文包括以下5方面内容:1.酰胺类化合物对照品的制备经过反复硅胶柱层析和制备HPLC法分离得到5种酰胺类化合物。利用波谱技术(包括UV,IR,MS,¹H-NMR,¹³C-NMR)鉴定结构,分别为N-isobutyl-（3’,4’-methylenedioxyphenyl）-2E,4E-heptadienamide、laetispiamide A、laetispiamide B、laetispicine和Dihydropipercide。2.总生物碱的含量测定方法首次建立了紫外分光光度法和半微量凯式定氮法两种含量测定方法,测定大叶蒟抗抑郁有效部位总生物碱的含量,方法简便,可行。3.抗抑郁有效部位制备工艺研究首次将“星点设计—效应面法”引入大叶蒟提取工艺研究,该方法简便,试验次数较少。在模型建立上采用非线性数学模型拟合,复合相关系数较高,预测值更接近真实值（RSD=3.5%）。创建了大叶蒟抗抑郁有效部位最佳提取与纯化工艺,采用氮测定法测定酰胺类化合物含量最高可达58%。提取工艺:考察乙醇浓度、提取时间及提取溶剂用量和提取次数各因素对总生物碱提取率的影响。以总生物碱含量为指标对提取工艺进行优化,实验采用星点设计—效应面法,优化工艺条件为70%乙醇为提取溶剂,乙醇用量为药材12倍（提取3次,每次回流30 min）。纯化工艺研究:筛选液—液萃取法分离有效部位总生物碱含量最高的最佳工艺条件。大叶蒟浸膏用蒸馏水配制为浓度为100 mg/mL的料液,3倍量石油醚脱脂后,乙酸乙酯:水=4:1萃取,减压蒸干溶剂,得有效部位浸膏。4.5种酰胺类化合物的含量测定首次建立了同时测定大叶蒟中5个主要的酰胺类单体指标成分N-isobutyl-（3’,4’-methylenedioxyphenyl）-2E,4E-heptadienamide、laetispiamide A、laetispiamide B、laetispicine和Dihydropipercide含量的高效液相色谱分析方法,为制定大叶蒟抗抑郁活性部位的指纹图谱奠定了一定的基础。该方法简便可行,为原料药其质量控制提供依据。色谱条件为甲醇:水（V/V）=77:23,流速1.5 mL/min,259 nm检测。首次对大叶蒟中5种指标成分进行了初步的定性和定量的研究。考察了三批大叶蒟不同营养器官中各化合物的含量。其中果实中laetispicine的含量最高,粗枝中laetispicine的含量也较高,根的laetispiamide A的含量最高,（分别约占原植物的1.1‰、0.2‰和1.6‰）。首次提出以laefispicine作为大叶蒟特征性成分,从同科属植物中鉴别大叶蒟。对我国10种其它胡椒属植物中各化合物的含量进行测定,均未能检出大叶蒟抗抑郁活性成分laefispiamide A、laetispiamide B和laetispicine,并且laetispicine周围没有干扰成分。5.大叶蒟不同部位和黑胡椒挥发油化学成分的研究采用GC-MS首次分析了大叶蒟根、茎、叶、果实和黑胡椒的挥发油化学成分,并将各挥发油的主要成分进行了对比。共鉴定出化合物189个（根,64个;茎,93个;叶,87个;果实,58个;黑胡椒,42个）,鉴定率均在90%以上。通过将其挥发油进行对比分析,为进一步研究药用植物大叶蒟提供了科学的依据。化合物樟烯、1,4（8）-对一孟二烯、α-筚澄茄烯、反式—石竹烯、可巴烯、1（5）-愈创木二烯和1（10）,4-筚澄茄二烯为大叶蒟各部位和黑胡椒共有的,其中反式—石竹烯的含量均较多,分别为大叶蒟根9.29%,茎12.54%,叶13.45%,果实2.60%;黑胡椒29.11%.。除以上化合物以外,只有α-蒎烯为大叶蒟不同部位的挥发油所共有的。

全文目录

摘要  5-8
Abstract  8-11
概论  11-17
  第一节抗抑郁药物研究现状  11-14
  第二节胡椒属植物研究进展  14-17
第一部分抗抑郁有效部位制备工艺研究  17-56
  第一章对照品的制备和纯化  18-25
    1、实验材料和仪器  18-19
    2、实验方法  19
    3、实验结果  19-24
      3.1.制取粗品  19-20
      3.2.高效制备液相色谱法纯化  20-24
    4、讨论  24-25
  第二章总生物碱的含量测定方法研究  25-34
    第一节紫外分光光度法  26-30
      1、实验材料和仪器  26
      2、实验方法  26-29
        2.1.样品前处理  26
        2.2.样品溶液的制备  26
        2.3.对照品溶液的制备  26
        2.4.检测波长的选择  26-27
        2.5.标准曲线的绘制  27-28
        2.6.准确度  28
        2.7.精密度  28-29
        2.8.稳定性  29
        2.9.重复性  29
      3、实验结果  29-30
    第二节凯式定氮法  30-33
      1、实验材料和仪器  30
      2、试液的配制  30-31
      3、实验方法  31-32
      4、实验结果  32-33
    第三节讨论  33-34
  第三章大叶蒟有效部位制备工艺研究  34-46
    第一节有效部位提取工艺研究  35-42
      1、实验材料和仪器  35-36
      2、实验方法与结果  36-40
        2.1.不同浓度乙醇的考察  36-37
        2.2.提取时间的考察  37-38
        2.3.提取溶剂用量和提取次数的考察  38
        2.4.星点设计法优选大叶蒟提取工艺条件  38-40
      3、讨论  40-42
    第二节大叶蒟有效部位的纯化工艺研究  42-46
      1、萃取剂的选择  42-43
      2、萃取工艺及操作条件的确定  43-45
        2.1.水相中被萃取组分浓度对总生物碱萃取率的影响  43-44
        2.2.萃取相比(O/W)对总生物碱萃取率的影响  44
        2.3.萃取工艺确定  44
        2.4.实验结果  44-45
      3、讨论  45-46
  第四章大叶蒟药材HPLC法定量研究  46-56
    1、材料、试剂与仪器  46-47
    2、实验方法  47-52
      2.1.样品处理方式及色谱条件的选择  47-50
      2.2.方法学考察  50-52
    3、结果与分析  52-55
      3.1.原药材化合物的含量测定  52-54
      3.2.我国常见胡椒属植物中化合物含量测定  54
      3.3.大叶蒟有效部位化合物含量测定  54-55
    4、讨论  55-56
第二部分挥发油化学成分研究  56-77
  第五章挥发油化学成分GC-MS分析  57-77
    1、材料及方法  57
    2、仪器及实验条件  57
    3、结果  57-76
    4、讨论  76-77
参考文献  77-80
结语  80-81
致谢  81-82
附录一  82-95
附录二  95-100

大叶蒟抗抑郁有效部位制备工艺、质量标准研究及大叶蒟挥发油化学成分研究

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