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柱前衍生化HPLC法在远志质量控制中的应用初探

作　者: 孙晋鹏
导　师: 秦雪梅
学　校: 山西大学
专　业: 药物化学
关键词: 柱前衍生化 HPLC 远志 远志皂苷元 含量测定
分类号: R284
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
下　载: 29次
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内容摘要


皂苷是中药中含量较大,活性较强的一类化合物,在抗肿瘤、抗菌、治疗心血管疾病、调节机体代谢及免疫等方面有良好的效果,常作为指标性成分来评价中药的质量。但由于皂苷类化合物结构特殊,缺乏紫外特征吸收基团,常存在末端吸收问题,其测定较难进行,这也是中药质量控制的难题之一。近年来,衍生化技术发展迅速,已广泛应用于氨基酸类、脂肪酸类、生物碱类、酯类、醇类、醛类、糖类及对映体等药物的分析,也有人应用于中药中皂苷类成分的分析。因为远志皂苷是远志药材的主要活性成分,但采用现有方法较难测定,所以本课题以远志为考察对象,以远志皂苷的盐酸水解产物远志皂苷元(senegenin)为基本研究对象,采用现有仪器设备,初步探索了柱前衍生化HPLC-UV测定远志皂苷元的方法,该方法也为皂苷类成分的测定提供参考。本课题主要研究内容和方法：1.以远志药材为研究对象,考察了远志药材脱脂,远志皂苷提取、水解的条件,以及大孔吸附树脂柱层析、硅胶柱层析、中压制备柱分离制备远志皂苷元的最佳条件,并在此基础上,分离制备了远志皂苷元,然后采用紫外光谱(UV)、质谱(MS)、核磁波谱(1HNMR)等手段鉴定了远志皂苷元,最后采用HPLC-UV面积归一化法测定了远志皂苷元的纯度。2.以远志皂苷元(senegenin)为研究对象,对远志皂苷元进行衍生反应研究。主要考察了衍生试剂、衍生反应监测方法、衍生反应方式、衍生反应溶剂、衍生反应物料比、衍生反应时间等因素,最终确定了远志皂苷元的最优化衍生反应条件为：采用磁力搅拌,以二氯甲烷为溶剂,4-二甲氨基吡啶(DMAP)为催化剂,吡啶用量(体积)远志皂苷元(质量)的比例为v吡啶：m远志皂苷元=50：1,苯甲酰氯与远志皂苷元的反应物料比m笨甲酰氯：m远志皂苷元=60：1,冰水浴反应时间为1 h。此条件下远志皂苷元完全反应。3.以远志皂苷元为研究对象,在最优化衍生反应条件的基础上,合成了远志皂苷元衍生物,同时考察了硅胶柱层析、凝胶柱层析、半制备高效液相分离制备衍生物的方法,并制备远志皂苷元衍生物纯品,然后采用紫外光谱(UV)、质谱(MS)、核磁波谱(1HNMR)等手段鉴定了衍生物,其分子式为C44H53CIO8,并将其命名为2,3-二苯甲酰氧基-远志皂苷元,最后采用HPLC-UV面积归一化法测定了远志皂苷元的纯度,其纯度符合定量分析的化学对照品要求,从而为柱前衍生化HPLC-UV测定远志皂苷元提供对照品。4.在远志皂苷元衍生反应研究的基础上,初步探索了远志中远志皂苷元柱前衍生化HPLC-UV测定方法,测定色谱条件为：色谱柱：Diamonsi(钻石)C18(200mm×4.6 mm,5μm);流动相：甲醇-0.05%磷酸溶液(80：20)；流速：1.0 ml-min-1;检测波长：230 nm；柱温：室温；进样量：20μl。结果：线性方程为Y=24310X+2.116(相关系数r=0.9995),线性范围：0.0165～0.33 mg.m1-1,最低检测浓度是0.12μg·ml-1,最低检测量为2.3 ng。该测定方法准确、灵敏度较高。本文探索的柱前衍生化HPLC-UV测定远志中远志皂苷元的方法,避免了紫外检测末端吸收困难问题,具有灵敏度高的优点,但本实验的某些方面不够完善,有待于进一步研究。

全文目录


摘要  8-10
ABSTRACT  10-13
第一章 引言  13-16
  1. 立题目的与意义  13-14
  2. 本课题的主要研究内容和创新点  14-16
第二章 文献综述  16-29
  1. 中药质量控制研究  16-17
    1.1 中药质量控制的目的和意义  16
    1.2 中药质量控制的现状  16-17
  2. 远志研究概述  17-25
    2.1 远志本草考究  17-18
    2.2 化学成分研究  18-21
    2.3 药理作用研究  21-22
    2.4 质量标准研究  22-25
  3. 柱前衍生化技术及其应用研究概述  25-29
    3.1 衍生化简介  26
    3.2 柱前衍生化技术及其应用  26-27
    3.3 柱前衍生化HPLC法应用于皂苷质量控制  27-29
第三章 远志皂苷元的分离鉴定  29-41
  1. 仪器与试药  29-30
  2. 方法与结果  30-39
    2.1 远志皂苷元的分离制备  30-36
    2.2 远志皂苷元的表征  36-38
    2.3 结果  38-39
  3. 结论与讨论  39-41
第四章 远志皂苷元单体衍生化反应研究  41-52
  1. 仪器与试药  41
  2. 方法与结果  41-49
    2.1 衍生反应试剂的选择  42-45
    2.2 衍生反应条件的考察优化  45-49
  3. 结论与讨论  49-52
第五章 远志皂苷元衍生物的合成分离与表征  52-60
  1. 仪器与试药  52-53
  2. 方法与结果  53-59
    2.1 远志皂苷元衍生物的合成  53
    2.2 硅胶柱层析分离衍生物  53-54
    2.3 凝胶柱层析分离衍生物  54-55
    2.4 半制备型高效液相色谱分离衍生物  55-56
    2.5 衍生物的表征  56-59
  3. 结论与讨论  59-60
第六章 柱前衍生化HPLC-UV测定远志中远志皂苷元的含量  60-69
  1. 仪器与试药  60-61
  2. 方法与结果  61-67
    2.1 色谱条件  61
    2.2 对照品溶液的制备  61
    2.3 供试品溶液的制备  61-63
    2.4 方法学考察  63-66
    2.5 样品含量测定  66-67
  3. 结论与讨论  67-69
    3.1 样品处理中的问题  67
    3.2 色谱方法中的问题  67-68
    3.3 关于本实验的不足之处  68-69
第七章 结论与展望  69-72
  1. 结论  69
  2. 展望  69-71
  3. 硕士期间掌握的主要技术和学习心得  71-72
参考文献  72-83
攻读学位期间取得的研究成果  83-84
致谢  84-86

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中图分类: > 医药、卫生 > 中国医学 > 中药学 > 中药化学
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