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TGFβ 1siRNA对胎鼠肺成纤维细胞高氧损伤的干预作用

作　者: 刘海英
导　师: 柳国胜
学　校: 暨南大学
专　业: 儿科
关键词: 肺成纤维细胞转化生长因子β1 RNA干扰小分子干扰RNA 慢性肺疾病胎鼠
分类号: R722.6
类　型: 硕士论文
年　份: 2008年
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内容摘要

目的:通过观察TGFβ1 siRNA对体外培养的胎鼠肺成纤维细胞TGFβ1表达的影响,探讨TGFβ1siRNA对TGFβ1基因表达的调控作用,为进一步在动物活体内进行TGFβ1的RNA干扰实验奠定基础,为临床防治早产儿慢性肺疾病提供新方法。方法:原代分离、培养19天胎龄的SD大鼠肺成纤维细胞,并纯化、鉴定及建立成纤维细胞高氧损伤模型。将针对大鼠TGFβ1基因mRNA序列,设计、合成携带3条TGFβ1siRNA绿色荧光蛋白融合表达质粒载体,以及阴性质粒和空质粒,通过JetPET包裹分别转染上述高氧损伤的胎鼠肺成纤维细胞。于转染后24h、48h和72h收集细胞,在荧光显微镜下观察干扰效果,采用实时荧光定量PCR检测各组细胞TGFβ1基因表达情况,并计算干扰效率。结果:(1)成功分离、培养19天胎龄的SD大鼠肺成纤维细胞,并纯化、鉴定及建立成纤维细胞高氧损伤模型。每4只19d胎鼠肺组织可获LFs细胞数平均为(1.50±0.10)×10~8。纯度高达(96±1)%,细胞的活力为(97±2)%。(2)JetPET包裹质粒转染胎鼠肺成纤维细胞后在荧光显微镜下观察,可见转染后24h、48h和72h TGFβ1siRNA质粒组细胞绿色荧光强度均明显弱于阴性质粒组细胞,空质粒载体组未产生绿色荧光。(3)荧光定量PCR检测转染后胎鼠肺成纤维细胞TGFβ1mRNA表达量,其中转染后72h阴性质粒组表达量最高(P＜0.05),转染后24hTGFβ1siRNA质粒组表达量最低(P＜0.05);转染后24h、48h和72hTGFβ1siRNA质粒组TGFβ1mRNA表达量均显著低于阴性质粒组(P＜0.01),其基因干扰效率则依次递减,分别为97.3%、96.9%和71.7%。结论:TGFβ1siRNA表达质粒能够有效地从mRNA水平沉默胎鼠肺成纤维细胞TGFβ1基因,其基因干扰效率随转染后时间的增加而递减。

全文目录

中文摘要  5-7
英文摘要  7-9
简略词表  9-11
前言  11-21
  1 课题研究意义  11
  2 国内外研究现状及分析  11-16
  3 合适动物的选择和细胞模型的建立  16-18
  参考文献  18-21
第一部分胎鼠肺FLs的原代分离、培养、纯化、鉴定及细胞活力的检测  21-37
  材料与方法  21-31
  结果  31-33
  讨论  33-35
  结论  35-36
  参考文献  36-37
第二部分 TGFβ1siRNA对高氧损伤胎鼠肺成纤维细胞合成TGFβ1的影响  37-73
  材料与方法  37-45
  结果  45-53
  讨论  53-67
  结论  67-68
  参考文献  68-73
附录  73-75
在校期间发表的论文  75-76
参加的学术会议  76-77
致谢  77

TGFβ 1siRNA对胎鼠肺成纤维细胞高氧损伤的干预作用

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