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致鸡胚死亡原因的流行病学调查

作　者: 薛冬玲
导　师: 刁有祥
学　校: 山东农业大学
专　业: 预防兽医
关键词: PCR 多重PCR 胚胎病
分类号: S858.31
类　型: 硕士论文
年　份: 2008年
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内容摘要

鸡的胚胎性疾病是指鸡胚在发育过程中,由于某些异常的理化和生物因素的作用,出现发育偏差,以致发生病变、畸形和死亡的现象。鸡胚胎病根据其发病机理和发病原因的不同可将其分为遗传性胚胎病、营养性胚胎病、传染性胚胎病以及孵化条件不当引起的胚胎病,其中已传染性胚胎病最为常见,给种鸡场带来巨大的经济损失。因此本实验对造成仔鸡胚胎病的发病原因及流行病学进行系统的研究,为该病的预防和控制提供理论基础。本试验共分为3部分:试验一、大肠杆菌、沙门氏菌和葡萄球菌多重PCR检测方法的建立根据GenBank中已发表的大肠杆菌、沙门氏菌和葡萄球菌保守基因序列设计合成3对特异性引物,建立了大肠杆菌、沙门氏菌和葡萄球菌多重PCR检测方法,并进行灵敏性试验、特异性试验。特异性试验结果表明该研究建立的大肠杆菌、沙门氏菌和葡萄球菌多重PCR检测方法只能扩增出大肠杆菌、沙门氏菌和葡萄球菌相对应的特异性目的片段,链球菌、副鸡嗜血杆菌等均为阴性;敏感性试验结果表明建立的该方法能同时检测出10ng的大肠杆菌、沙门氏菌和葡萄球菌,大肠杆菌和沙门氏菌的最低检出限量为100pg。进而说明该研究建立的大肠杆菌、沙门氏菌和葡萄球菌多重PCR检测方法敏感性高、特异性强,适用于大肠杆菌、沙门氏菌和葡萄球菌的流行病学调查研究。实验二、REV、H9N2、CIAV和VAV多重PCR检测方法的建立该研究根据REV、VAV和H9N2亚型禽流感病已发表的基因序列设计合成4对特异性引物,建立了多重PCR检测方法。特异性试验结果表明建立的该方法只能扩增出相应病毒,其它病毒扩增结果均为阴性;敏感性试验结果表明建立的该多重PCR检测方法最低能同时扩增出10-5稀释的病毒核酸。以上研究结果表明该研究建立的多重PCR检测方法是一种灵敏度高、特异性强、准确、快速的检测方法,为网状内皮组织增生征病毒、传染性贫血病毒、呼肠孤病毒和H9N2亚型流感病毒流行病学调查和诊断提供一种良好的方法。实验三、山东省某规模化种鸡场仔鸡肧死亡原因的流行病学调查用建立的多重PCR方法对该种鸡场仔鸡胚胎病发病原因进行检测,结果表明死胚中大肠杆菌、沙门氏菌、支原体的检出率分别为25%、4%、2.5%,葡萄球菌的检出率为0;病毒检测结果表明只从产蛋种鸡中检测到H9N2亚型流感病毒,传染性贫血病毒、网状内皮组织增生征病毒和呼肠孤病毒均为阴性。

全文目录

中文摘要  7-9
英文摘要  9-11
前言  11-35
  1 营养性胚胎病  11-16
    1.1 综合性营养不良胚胎病  11-12
    1.2 维生素A 缺乏或过量引起的胚胎病  12-13
    1.3 维生素B1 缺乏引起的胚胎病  13
    1.4 核黄素（维生素B2）缺乏引起的胚胎病  13-14
    1.5 维生素B12 缺乏引起的胚胎病  14-15
    1.6 维生素D 缺乏因起的胚胎病  15
    1.7 维生素E 缺乏引起的胚胎病  15-16
  2 孵化条件不当引起的胚胎病  16-19
    2.1 种蛋存放条件的影响  16
    2.2 孵化条件不当  16-19
  3 传染性胚胎病  19-28
    3.1 细菌性胚胎病  19-22
    3.2 病毒性胚胎病  22-27
    3.3 其它  27-28
  4. 鸡群中免疫抑制性病毒蛋传病毒的多重感染  28-30
  5. 鸡胚胎病的诊断  30-32
  6. 鸡胚胎病的防制  32-34
    6.1 种鸡的饲养  32
    6.2 种蛋的消毒  32-33
    6.3 及时捡出病胚、死胚  33
    6.4 胚胎疾病的治疗  33-34
  7 研究的目的与意义  34-35
试验一大肠杆菌、沙门氏菌和葡萄球菌多重 PCR 检测方法的建立  35-51
  摘要  35
  1 材料与方法  35-43
    1.1 材料  35-38
      1.1.1 细菌  35-36
      1.1.2 仪器与试剂  36
      1.1.3 培养基的制备  36
      1.1.4 常用试剂的配制  36-37
      1.1.5 引物设计  37-38
    1.2 方法  38-43
      1.2.1 细菌的增值  38
      1.2.2 细菌 DNA 的提取  38-39
      1.2.3 DNA 浓度的测定  39
      1.2.4 PCR 扩增  39
      1.2.5 PCR 产物的克隆与序列测定  39-43
      1.2.6 特异性试验  43
      1.2.7 敏感性试验  43
  2 结果  43-49
    2.1 PCR 扩增结果  43-45
    2.2 重组质粒的酶切鉴定结果  45-47
    2.3 特异性试验结果  47
    2.4 敏感性试验结果  47-49
    2.5 疑似病例的检测  49
  3 讨论  49-51
试验二 REV、H9N2、CIAV 和 VAV 多重 PCR 检测方法的建立与应用  51-60
  1 材料与方法  51-54
    1.1 材料  51-52
      1.1.1 病毒与细菌  51
      1.1.2 仪器与试剂  51-52
      1.1.3 SPF 鸡肧  52
      1.1.4 引物  52
    1.2 方法  52-54
      1.2.1 病毒的增值  52
      1.2.2 病毒核酸的提取  52-53
      1.2.3 RT-PCR 反应  53-54
      1.2.4 PCR 产物的克隆与序列测定  54
      1.2.5 特异性试验  54
      1.2.6 敏感性试验  54
  2 结果  54-58
    2.1 PCR 扩增结果  54-55
    2.2 PCR 产物的克隆及序列分析  55-56
    2.3 特异性试验结果  56
    2.4 敏感性试验结果  56-58
  3 讨论  58-60
试验三、山东省某规模化种鸡场仔鸡肧死亡原因的流行病学调查  60-64
  1 材料与方法  60-61
    1.1 材料  60-61
      1.1.1 仪器和试剂  60
      1.1.2 培养基的制备  60-61
    1.2 方法  61
      1.2.1 细菌学检查  61
      1.2.2 病毒学检查  61
      1.2.3 其它病原菌的检测  61
  2 结果  61-62
  3 讨论  62-64
结论  64-65
参考文献  65-70
致谢  70

致鸡胚死亡原因的流行病学调查

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